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      产品分类
    Sulfo-Cy5-E Maleimide(磺酸基-Cy5-乙基马来酰亚-胺)
    物品单位 价格 品牌
    1400 XKBio
    • 产地:上海
    • 型号:1 mg
    • 货号:XK0068
    • 发布日期: 2022-03-28
    • 更新日期: 2023-03-20
    产品详细说明
    产地 上海
    品牌 XKBio
    货号 XK0068
    用途范围 科研
    纯度 100%
    CAS编号
    规格 1 mg
    是否进口

    Sulfo-Cy5-E Maleimide(磺酸基-Cy5-乙基马来酰亚-胺)产品说明书 
    Sulfo-Cy5-E Maleimide(磺酸基-Cy5-乙基马来酰亚-胺) 
    产品货号:XK0068
    产品规格:1 mg
    应用范围:荧光标记染料、巯基标记染料 
     产品参数 
    外观:可溶于水、DMSO 或 DMF 的黑绿色固体 
    Ex/Em:647/665 nm 
    分子式:C39H46N4O9S2 
    分子量:778.9 
    消光系数:271,000 
    效能等同于:Alexa Fluor 657,TRITC,DyLight 640 等 
    分子结构图: 
     
     
    储存条件 
    -20℃避光保存,有效期见外包装。 
     产品介绍 
    花菁染料 Sulfo-Cy5-E 是一种远红外荧光标记染料,该
    染料具有高度亲水性和水溶性,含有游离的、未活化的单官
    能团羧酸。而 Sulfo-Cy5-E Maleimide 是 Sulfo-Cy5-E 染料的
    硫醇反应形式。Maleimide 与硫醇基团反应形成硫醚偶联产
    物。反应可以在 pH=7 的胺中进行。在中性 pH 环境中,
    Maleimide 基团不与组氨酸或精氨酸反应。 
    菁染料是性能优良的荧光染料,摩尔吸光系数在荧光染
    料中是无可比拟的,其琥珀酰亚胺酯是常用的脂肪氨基标记
    试剂,广泛用于蛋白、抗体、核酸及其他生物分子的标记和
    检测。通过改变次甲基链的长度,可改变其荧光发射波长,
    每增加一个双键,按照 Huoffman 规则正好红移约 100 nm。  
    水溶性菁染料 Cy3 和 Cy5 已成为基因芯片的普遍荧光
    标记物;另外,Cy5,Cy5.5 和 Cy7 的吸收在近红外区背景
    非常低,是荧光强度较高、稳定性较好的长波长染料。特别
    适合于活体小动物体内成像代替放射性元素。 
     
    使用方法(以标记IgG抗体为例) 
    1. 实验材料 
    (1)无水 DMSO 
    (2)10-100 mM 磷酸盐(例如 PBS),Tris 或 HEPES 缓冲
    液,pH 7.0-7.5 
    (3)交联葡聚糖 G-25 
    (4)(可选)用 Tris-(2-carboxyethyl) phosphine(TCEP)还
    原蛋白质中二硫键以产生游离巯基。 
    (5)NaN3 
    (6)BSA 
    2. 标记方法和步骤 
    (1)准备标记抗体 
    a.  在室温下,将抗体溶于缓冲液中,使终浓度为 50-100 μM
    (IgG为 7.5-15 mg/mL)。 
    b.  任选步骤:如果要让蛋白质中的二硫键释放出更多的硫
    醇基团,则可以在此阶段加入约10倍摩尔数的过量的TCEP。
    将反应溶液孵育约 30 min。还原反应和随后的标记反应
    在惰性气体(N2或 Ar)存在下进行,以防止二硫键重新形
    成。  
    (2)准备染料储备液 
    取出 Sulfo-Cy5-E Maleimide 染料,恢复至室温。制备
    10 mM 染料储液。对于 1 μmol 染料:向小瓶中加入 100 μL
    无水 DMSO 即可。短暂涡旋,完全溶解染料,然后进行短
    时间离心,使染料集中于管子底部。 
    注: a.  如果要用少量的蛋白质进行标记反应,染料储备溶液
    可能需要稀释至更低浓度,以保证量取体积的准确性。 
    b.  未使用的储液可避光、干燥储存于-20℃,以备后续 
    使用。如果使用无水 DMSO 制备溶液,染料可稳定至少一
    个月。 
    c.  染料储备溶液也可以用 ddH2O 或含水缓冲液中制备。
    然而,因为染料会随着时间的推移而水解,所以水溶性的储
    存液需要现配现用,不能保存后再使用。 
    (3)标记反应步骤 
    a.  在搅拌或涡旋蛋白质溶液的同时,加入一定量的染料储
    备溶液,以产生染料、蛋白摩尔比为 10-20 的混合液。例如,
    对于 50 μM 的 IgG,应添加染料至染料最终浓度为 0.5-1 mM。  
    b.  在室温下避光搅拌反应2h或 4℃过夜。 
    注:进行标记反应的同时,进行步骤(4)a制备葡聚糖柱。 
    (4)从反应液中分离标记蛋白 
    a.  用 PBS 缓冲液(pH~7.4)平衡葡聚糖柱(10 mm × 300 
    mm)。 
    b.  将步骤(3)b 中的反应溶液装载到柱上,并用 PBS 缓冲
    液洗脱柱。从柱中洗脱的 条带对应于抗体缀合物。 
    注:对于小规模的标记反应,为了避免产物过度稀释,可以
    使用超滤装置去除结合物中游离染料。10K 超滤管可用于 
    IgG蛋白;具有不同分子量的蛋白需要不同的超滤管。 
     
    3. 确定 DOL 
    (1)确定蛋白浓度 
    染料标记的抗体浓度可通过以下公式计算: 
    C(mg/mL) = {[A280 -(Amax × Cf)]/1.4} ×  稀释因子。 
    a. C 是指实验收集的 YF 标记的抗体浓度; 
    b.  稀释因子是指在吸光度测量时的稀释倍数; 
    c. A280和Amax分别是指在280nm处的吸光度以及在 吸收
    波长(~647nm)处的吸光度; 
    d. Cf  是校正因子,Sulfo-Cy5-E Maleimide的Cf值为0.13; 
    e. 1.4则是指IgG的消光系数; 
    注:过柱洗脱的蛋白溶液直接用于吸光度检测可能浓度过大,
    因此需要稀释到大约0.1 mg/mL。稀释倍数(即稀释因子)
    需要从起初抗体数量(比如5 mg)以及收集的洗脱蛋白液的
    体积来进行预估。 
    (2)DOL的估算 
    DOL通过下式计算: 
    DOL = (Amax × Mwt ×  稀释因子)/(ε × C) 
    a. Amax,稀释因子,C值在3.1中已经明确; 
    b. Mwt是指IgG的分子量(~150,000); 
    c. ε是Sulfo-Cy5-E Maleimide的摩尔吸光系数。 
     
    注意事项 
    1. 产物如需长期储存,我们建议添加BSA和NaN3,并使其
    终浓度分别为5-10 mg/mL和0.01-0.03%,以防变性和微生物
    污染。 
    2.  标记好的抗体溶液应4℃避光保存,如果加入终浓度为50%
    的甘油,则可储存在-20℃, 在这些条件下,产物可稳定保存
    一年或更长时间。 
    本产品仅用于科研

    Sulfo-Cy5-E Maleimide(磺酸基-Cy5-乙基马来酰亚-胺)