牛羊口蹄疫病毒A型抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书

【产品名称】

通用名：牛羊口蹄疫病毒A型抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Bovine and sheep Foot and Mouth Disease Virus A （ELISA）

【包装规格】

96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

【预期用途】

口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus，FMDV）引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，其特征为口腔黏膜、蹄部、乳房皮肤发生水泡和烂斑。

本试剂用于检测牛羊血清中口蹄疫病毒A型抗体，可用于口蹄疫病毒A型疫苗免疫效果评价。

【原    理】

本试剂盒由预包被口蹄疫病毒A型抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测牛羊血清样本中口蹄疫病毒A型抗体。实验时在酶标板中加入待检样本和抗体工作液，经温育后洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，若样品中含有口蹄疫病毒A型抗体则将阻断抗体工作液与酶标板上抗原结合，从而使后续反应不出现显色；反之则出现显色；显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值， 即可知样品是否含有口蹄疫病毒A型抗体。

【储存及有效期】

2～8℃保存，有效期12个月。包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。

【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。

【样品准备】

1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

2.待检血清样本恢复室温、混匀待用。阴、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)。

【检验方法】

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条，设阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照50μl；样品孔每孔先加入45μl工作洗涤液,再加入5μl血清样本（稀释比例为1:10）。

4.每孔加抗体工作液50μl，混匀，盖好盖板膜，置37℃（推荐水浴）避光反应30分钟。

5.甩去孔内液体，每孔加350 ul工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，*一次拍干。

6.每孔加酶标记物100μl，盖好盖板膜，置37℃避光反应30分钟。

7.洗涤，同步骤5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，盖好盖板膜，置37℃避光反应15分钟。

9.每孔加终止液50μl，混匀，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。

【参考值】

实验正常的情况下，阴性对照吸光值≥0.8，阳性对照吸光值≤阴性对照吸光值×50%。

【检验结果的解释】

1.PI（阻断率）=（1-样本值/阴性对照孔均值）×100%，PI≥50%为阳性；PI＜50%为阴性。

2.本实验结果为阴性时表明抗体水平不足，建议补打相应疫苗。

【试验方法的局限性】

该试验仅作为定性检测牛羊血清中口蹄疫病毒A型抗体，根据PI值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。

【注意事项】

1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。

2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。

4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。

5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。

6.用于检测的样品应保持新鲜。

7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

8.不同批号试剂组分不得混用。