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      产品分类
    Sulfo-Cy3-E-dUTP(磺酸基-Cy3-乙基-dUTP)
    物品单位 价格 品牌
    3160 XKBio
    • 产地:上海
    • 型号:25 nmole
    • 货号:XK0048
    • 发布日期: 2022-03-28
    • 更新日期: 2022-03-28
    产品详细说明
    产地 上海
    品牌 XKBio
    货号 XK0048
    用途范围 科研
    纯度 100%
    CAS编号
    规格 25 nmole
    是否进口

    Sulfo-Cy3-E-dUTP(磺酸基-Cy3-乙基-dUTP)产品说明书 
    Sulfo-Cy3-E-dUTP(磺酸基-Cy3-乙基-dUTP) 
    产品规格:25 nmole 
    产品货号:XK0048
    应用范围:荧光标记染料 
     产品参数 
    Ex/Em:548/565 nm 
    分子式:C43H53N5Na3O21P3S2 
    分子量:1201.9 
    消光系数:162,000 
    分子结构图: 
     
     
    储存条件 
    -20℃避光保存,有效期见外包装,可以采用 pH 7.4 的 10 
    mM Tris 溶解后,分装保存,避免反复冻融。 
     
    使用方法 
    DNA 标记 
    1. 试剂(自备) 
    (1)Taq DNA聚合酶 
    (2)10× Taq reaction buffer 
    (3)25 mM MgCl2 
    (4)dATP,dTTP,dCTP,dGTP(单独溶液),1 mM each 
    (5)DNA模板 
    (6)正向、反向引物,10 μM each 
    (7)PCR 清洁试剂盒 
    2. PCR反应 
    (1)按照表 1 反应体系配制PCR 反应混合液: 
    (2)每个反应管加 1 μL 1 mM Sulfo-Cy3-E-dUTP 
    注:阴性对照管,加1 μL 1mM dTTP代替Sulfo-Cy3-E-dUTP。  
    (3)按照表 2 程序运行PCR反应 
    注:a  热变性时间依据不同的 Taq 酶进行调整 
    b  退火温度设置:Tm - 5℃ 
    c  延伸时间根据扩增片段大小而定,一般 200-300 bp 片
    段设为 1 min 即可。 
    (4) 可选步骤, 用PCR 清洁试剂盒去除未掺入的单核苷酸。  
    表 1. PCR反应体系 
    组分  体积  终浓度 
    10×Taq reaction buffer  2 μL  1×  
    25 mM MgCl2  2 μL  5 mM 
    1 mM dATP  2 μL  100 μM 
    1 mM dCTP  2 μL  100 μM 
    1 mM dGTP  2 μL  100 μM 
    1 mM dTTP  1 μL  50 μM 
    10 μM 正向引物  1 μL  500 nM 
    10 μM 反向引物  1 μL  500 nM 
    模板  1 ng  50 pg/uL 
    Taq  1 U  0.05 U/μL 
    dH2O  up to 19 μL   
    表 2. PCR反应条件 
    94℃ 2 min 
    ①  Hold 
    94℃ 30 sec  30 个循环  
    50-60℃ 30 sec 
    ② 
    72℃ 1 min 
    ③ 
    72℃ 5 min  Hold 
    (5)取 10%的PCR 产物进行琼脂糖凝胶电泳(凝胶不加入
    DNA染料),检测 PCR 反应的效率和特异性,通过紫外凝
    胶成像仪或激光凝胶扫描仪观察。 
    注:凝胶染色前先观察染料的荧光,以免与下一步的凝胶染
    料发生荧光淬灭。 
    (6)采用后染法,使用 DNA 凝胶染料对凝胶进行染色, 
    观察总的PCR 产物或阴性对照组的PCR 扩增产物。 
    TUNEL 法检测细胞凋亡 
    注:我司提供了一系列染料的 Cy Dye TUNEL Assay Kits,
    其中试剂盒成分包括:平衡缓冲液、Cy dye TUNEL反应缓
    冲和 TdT酶。 
    1. 试剂(自备) 
    (1)PBS,pH 7.4 
    (2)4%多聚甲醛(in PBS) 
    (3)70%乙醇(可选) 
    (4)0.2% Triton™ X-100 in PBS 
    (5)0.1% Triton™ X-100 in PBS/5 mg/mL bovine serum 
    albumin(BSA) 
    (6)12.5 U/μL末端脱氧核糖核苷酸转移酶(TdT) 
    (7)5×TdT反应缓冲液:1 M二甲基胂酸钾,125 mM Tris-
    HCl,1.25 mg/mL BSA,pH 6.6 
    (8)25 mM CoCl2溶液 
    (9)100 μM dATP 
    2. 样品准备 
    (1)细胞或新鲜冷冻组织切片的准备 
    a.  准备一份不含 TdT酶的样品作为阴性对照。(可选步骤) 
    b.  用PBS 清洗细胞或者组织切片两次。 
    c.  向上述细胞或组织切片中加入 4%多聚甲醛,4℃孵育 30 
    min。 
    d. 用 70%乙醇重悬细胞,-20℃可储存两周。(可选步骤)  
    e.  用PBS 清洗两次。 
    f.  促渗加入适量的 0.2% Triton™ X-100 的PBS 溶液,室温
    孵育 30 min。 
    g.  用PBS 清洗两次。 
    (2)石蜡组织切片的准备 
    a.  准备一份不含 TdT酶的样品做阴性对照。(可选步骤) 
    b.  根据标准步骤进行脱蜡或水化处理。 
    c.  用PBS 清洗两次。 
    d.  用20 μg/mL蛋白酶 K( in PBS)促渗,处理组织,37℃孵
    育 30 min。根据组织类型,蛋白酶 K 的孵育温度和时间可
    相应的变化。 
    e.  用PBS 清洗两次。 
    3. 反应混合液准备 
    (1)用去离子水将 Sulfo-Cy3-E-dUTP 稀释成10 μM。 
    (2)每个样品准备 100 μL TUNEL平衡缓冲液: 
    20 μL 5 × TdT反应缓冲液 
    20 μL 25 mM CoCl2 
    60 μL dH2O 
    (3) 每个样品准备50 μL TUNEL反应混合液,如下表所示: 
    组分  体积  最终浓度 
    5×TdT reaction buffer  10 μL  1×  
    25 mM CoCl2  10 μL  5 mM 
    100 μM dATP  2.5 μL  5 μM 
    10 μM Sulfo-Cy3-E-dUTP  2.5 μL  0.5 μM 
    12.5 U/μL TdT  1 μL  12.5 U/reaction 
    dH2O  24 μL   
    总体积  50 μL   
    4. TUNEL 染色 
    (1) 向样品中加入 100 μL平衡缓冲液,室温下孵育 5 min。 
    注:对于贴壁细胞或者组织切片,用石蜡盖玻片覆盖样品,
    使缓冲液均匀覆盖样品。 
    (2)去除平衡缓冲液,另外加入 50 μL反应缓冲液 
    注意:对于贴壁细胞或者组织切片,用盖玻片覆盖样品,使
    缓冲液均匀覆盖组织。 
    (3) 37℃避光孵育 60 min。组织切片需 37℃避光孵育 2 h。 
    注:a.  对于细胞或组织切片,孵育需在潮湿环境下进行。 
    b.  对于悬浮细胞,孵育需在摇床上进行,或者在孵育的 
    过程中,每隔 15 min,轻轻的摇晃一下反应液。 
    (4)用PBS、0.1% Triton X-100 或 5 mg/mL BSA清洗样品
    三次,每次 5 min。 
    (5)如需要,可进行样品复染。采用荧光显微镜或者流式
    细胞仪观察。TUNEL 标记的细胞的细胞核显示出明亮的荧
    光。不含 TdT酶的对照组可观察到细胞未被标记上荧光。 
    注意事项 
    1.  该产品推荐贮存浓度为10 mM,-20℃条件下至少可以保
    存一个月。 
    2.  荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光
    淬灭。 
    3.  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
    本产品仅用于科研

    Sulfo-Cy3-E-dUTP(磺酸基-Cy3-乙基-dUTP)