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日本乙型脑炎病毒(JEV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)
  • 品牌:XKBio
  • 产地:上海
  • 型号:50T
  • 货号:XK5037
  • 价格: ¥2800/盒
  • 发布日期: 2022-03-28
  • 更新日期: 2024-12-04
产品详请
产地 上海
品牌 XKBio
货号 XK5037
用途 科研
包装规格 50T
纯度 100%
CAS编号
是否进口


日本乙型脑炎病毒(JEV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)

【产品名称】

商品名称:日本乙型脑炎病毒(JEV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)

Name  :Japanese Encephalitis Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)


【包装规格】50T/盒


【预期用途】

日本乙型脑炎,又称流行性乙型脑炎,简称乙脑,是由日本脑炎病毒(Japanese encephalitis,JEV)引起的一种人畜共患传染病。JEV主要是通过带病毒的蚊虫叮咬传播,而猪是JEV的主要增殖宿主和扩散宿主。JEV可引起妊娠母猪发生流产和死胎、公猪发生睾丸炎,新生仔猪发生脑炎、育肥猪持续高热,对养殖户造成巨大的经济损失。日本乙型脑炎广泛存在于 许多国家,严重威胁着人类的健康。

本试剂盒适用于检测的脑海马回部组织、全血等标本中日本乙型脑炎病毒RNA,适用于日本乙型脑炎病毒感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。


【检验原理】

本试剂盒用一对日本乙型脑炎病毒特异性引物,结合一条特异性荧光探针,用一步法荧光RT-PCR技术对日本乙型脑炎病毒RNA进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。


【试剂组成】

名 称

规 格

酶液

50μL×1管

JEV反应液

500ul×2管

JEV阳性质控品

1.69×10^8拷贝/ml

50μL×1管

阴性质控品

250μL×1管

注:

1)  不同批号试剂不能混用。

2)  试剂盒内各试剂组分足够包装规格所标示的检测次数。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过5次,有效期12个月。


【适用仪器】

ABI 、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。


【标本采集】

病死或扑杀动物的脑海马回部组织2g;待检活动物,抽取全血5ml


【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过6个月,标本运送应采用2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。


【使用方法】

1.样品处理(样本处理区)

1.1 样本前处理

每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g,手术剪剪碎混匀后取0.5g于研磨器中研磨,加入1.5ml生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至1.5ml灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液100ul于1.5ml灭菌离心管中;全血样品待血凝后取血清100ul于1.5ml灭菌离心管中。


1.2 RNA提取

推荐采用上海晅科生物科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(离心柱提取法),请按照试剂盒说明书进行操作。


2.试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照;样品每满7份,多配制1份),每测试反应体系配制如下表:

试剂

JEV反应液

酶液

用量

20μL

1μL

将混合好的测试反应液分装到PCR反应管中,21uL/管。

3.加样(样本处理区)

将步骤1提取的RNA、阳性质控品、阴性质控品各取4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。

4.PCR扩增(核酸扩增区)

4.1    将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内;

4.2    设置好通道、样品信息,反应体系设置为25μL;荧光通道选择:

检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,ABI系列仪器请勿选择ROX参比荧光,选择None即可。


4.3    推荐循环参数设置:

步骤

循环数

温度

时间

收集荧光信号

1

1 cycle

42℃

20min

2

1 cycle

95℃

10min

3

40 cycles

94℃

15sec

55℃

30sec


5.结果分析判定

5.1 结果分析条件设定

设置Baseline和Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节Baseline的start值(一般可在3~15范围内调节)、stop值(一般可在5~20范围内调节),以及Threshold的Value值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。


5.2结果判断

阳性:检测通道Ct值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线;

可疑:检测通道35值≤38,建议重复检测,如果检测通道仍为35值≤38,且曲线有明显的增长曲线,判定为阳性,否则为阴性;

阴性:样本检测结果Ct值>38或无Ct值。

6.质控标准

阴性质控品:Ct>38或无Ct值显示;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且Ct值≤32;

以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

7.检测方法的局限性

? 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

? 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

? 阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

? 病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

? 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

? 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;

? 本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

注意事项

? 所有操作严格按照说明书进行;

? 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;

? 反应液应避光保存;

? 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

? 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;

? 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

? 实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

? 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


注意事项

[1] 殷震,刘景 华.动物病毒学[M].第2版.北京:科学出版社,1997,631~640.

[1] 金宁,胡仲明,冯书章等.人畜共患病学[M].北京:科学出版社,2007,243~262.


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