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      产品分类
    日本乙型脑炎病毒(JEV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)
    • 品牌:XKBio
    • 产地:上海
    • 型号:50T
    • 货号:XK5037
    • 价格: ¥2800/盒
    • 发布日期: 2022-03-28
    • 更新日期: 2024-02-28
    产品详请
    产地 上海
    品牌 XKBio
    货号 XK5037
    用途范围 科研
    纯度 100%
    规格 50T
    是否进口


    日本乙型脑炎病毒(JEV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)

    【产品名称】

    商品名称:日本乙型脑炎病毒(JEV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)

    Name  :Japanese Encephalitis Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)


    【包装规格】50T/盒


    【预期用途】

    日本乙型脑炎,又称流行性乙型脑炎,简称乙脑,是由日本脑炎病毒(Japanese encephalitis,JEV)引起的一种人畜共患传染病。JEV主要是通过带病毒的蚊虫叮咬传播,而猪是JEV的主要增殖宿主和扩散宿主。JEV可引起妊娠母猪发生流产和死胎、公猪发生睾丸炎,新生仔猪发生脑炎、育肥猪持续高热,对养殖户造成巨大的经济损失。日本乙型脑炎广泛存在于 许多国家,严重威胁着人类的健康。

    本试剂盒适用于检测的脑海马回部组织、全血等标本中日本乙型脑炎病毒RNA,适用于日本乙型脑炎病毒感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。


    【检验原理】

    本试剂盒用一对日本乙型脑炎病毒特异性引物,结合一条特异性荧光探针,用一步法荧光RT-PCR技术对日本乙型脑炎病毒RNA进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。


    【试剂组成】

    名 称

    规 格

    酶液

    50μL×1管

    JEV反应液

    500ul×2管

    JEV阳性质控品

    1.69×10^8拷贝/ml

    50μL×1管

    阴性质控品

    250μL×1管

    注:

    1)  不同批号试剂不能混用。

    2)  试剂盒内各试剂组分足够包装规格所标示的检测次数。

    【储存条件及有效期】

    -20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过5次,有效期12个月。


    【适用仪器】

    ABI 、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。


    【标本采集】

    病死或扑杀动物的脑海马回部组织2g;待检活动物,抽取全血5ml


    【保存和运输】

    上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过6个月,标本运送应采用2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。


    【使用方法】

    1.样品处理(样本处理区)

    1.1 样本前处理

    每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g,手术剪剪碎混匀后取0.5g于研磨器中研磨,加入1.5ml生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至1.5ml灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液100ul于1.5ml灭菌离心管中;全血样品待血凝后取血清100ul于1.5ml灭菌离心管中。


    1.2 RNA提取

    推荐采用上海晅科生物科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(离心柱提取法),请按照试剂盒说明书进行操作。


    2.试剂配制(试剂准备区)

    根据待检测样本总数,设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照;样品每满7份,多配制1份),每测试反应体系配制如下表:

    试剂

    JEV反应液

    酶液

    用量

    20μL

    1μL

    将混合好的测试反应液分装到PCR反应管中,21uL/管。

    3.加样(样本处理区)

    将步骤1提取的RNA、阳性质控品、阴性质控品各取4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。

    4.PCR扩增(核酸扩增区)

    4.1    将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内;

    4.2    设置好通道、样品信息,反应体系设置为25μL;荧光通道选择:

    检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,ABI系列仪器请勿选择ROX参比荧光,选择None即可。


    4.3    推荐循环参数设置:

    步骤

    循环数

    温度

    时间

    收集荧光信号

    1

    1 cycle

    42℃

    20min

    2

    1 cycle

    95℃

    10min

    3

    40 cycles

    94℃

    15sec

    55℃

    30sec


    5.结果分析判定

    5.1 结果分析条件设定

    设置Baseline和Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节Baseline的start值(一般可在3~15范围内调节)、stop值(一般可在5~20范围内调节),以及Threshold的Value值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。


    5.2结果判断

    阳性:检测通道Ct值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线;

    可疑:检测通道35值≤38,建议重复检测,如果检测通道仍为35值≤38,且曲线有明显的增长曲线,判定为阳性,否则为阴性;

    阴性:样本检测结果Ct值>38或无Ct值。

    6.质控标准

    阴性质控品:Ct>38或无Ct值显示;

    阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且Ct值≤32;

    以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

    7.检测方法的局限性

    ? 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

    ? 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

    ? 阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

    ? 病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

    ? 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

    ? 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;

    ? 本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

    注意事项

    ? 所有操作严格按照说明书进行;

    ? 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;

    ? 反应液应避光保存;

    ? 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

    ? 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;

    ? 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

    ? 实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

    ? 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


    注意事项

    [1] 殷震,刘景 华.动物病毒学[M].第2版.北京:科学出版社,1997,631~640.

    [1] 金宁,胡仲明,冯书章等.人畜共患病学[M].北京:科学出版社,2007,243~262.