Cy SE（Cy琥珀酰亚-胺酯） 产品说明书
Cy SE（Cy琥珀酰亚-胺酯）
货号  : XK5045
储存条件
-20℃避光保存，有效期见外包装。
产品介绍
Cy SE 是一种近红外荧光标记染料，可溶于有机溶剂如
DMSO，DMF，被广泛用于标记肽、蛋白质和寡聚体等生物
分子，特别是精细蛋白和易于变性的蛋白。 Cy系列染料除
了用于标记生物分子外，也常被用于动物活体成像。由于细
胞和组织的自发荧光在近红外波段小，而近红外光在生物组
织中的穿透深度较大，因此在检测复杂生物系统时，Cy 系
列染料能提供更高的特异性和灵敏度。同时，Cy 系列染料
还拥有紫外光区染料和同位素标记无法具备的生物安全性，
有利于在活生物体中监控各种标记分子的分布。

使用方法
1. Cy SE标记蛋白（常规方法）
（1）制备染料储存液
室温预热一管 1 mg的 Cy SE，在管中加入适量的无水
DMSO 或 DMF（不含胺），配制浓度为 10 mM 的染料储存
液。适当条件下，可以涡旋以便充分溶解染料。如果使用更
微量的蛋白进行标记反应，那么染料需要稀释至更低浓度。
注：剩余的染料储存液应于-20°C低温存放，以备后续使用。
如果使用无水 DMSO 配制染料储存液，那么染料至少可以
保存一个月。
（2）计算染料用量
Cy SE 染料用量[mg] = 8 ×标记蛋白质量× Cy SE 染料分子量
/标记蛋白分子量
注：8，染料蛋白摩尔比，是一个实验经验值，适用于常规
的蛋白、多肽标记。
（3）用 pH 8.3-8.5 的缓冲液重悬待标记蛋白
推荐使用 pH 8.3 的0.1 M 碳酸氢钠溶液，或者 0.1 M 磷
酸盐缓冲液，蛋白浓度控制在 1-10 mg/mL时的标记效果较
好。注意 pH 控制在8.3-8.5 之间。避免使用含有胺的缓冲液
（有时可以使用 Tris，但不推荐使用）。
注：当进行大规模标记（几百毫克 SE）时，注意由于SE 的
水解，混合物随时间趋于酸化。需要监测 pH  值，或使用更
浓的缓冲液。
（4）将染料加入蛋白溶液中，并涡旋混匀，冰上过夜或室
温反应至少 4 h。
（5）选用适当方法纯化染料-蛋白共轭物
凝胶过滤是普遍使用的一种大分子物质纯化的方法，另
外，也可以选择沉淀或色谱法分离提纯，针对蛋白或核酸的
纯化，也可选择乙醇或丙酮沉淀的方法。
（6）计算染料-蛋白共轭物浓度
染料-蛋白共轭物浓度的确定可通过以下公式计算：
C(mg/mL) = {[A280 -(Amax× Cf)]/ ε} ×  稀释因子
a.C 是指染料-蛋白共轭物浓度；
b.  稀释因子是指在光度测量时的稀释倍数；
c. A280和 Amax分别是指在 280 nm处的吸光度以及在吸收波
长处的吸光度；
d. Cf是校正因子；
e. ε 则是指蛋白的消光系数。
注：过柱洗脱的蛋白溶液直接用于吸光度检测可能浓度过大，
因此需要稀释至约 0.1 mg/mL。稀释倍数需要从起初抗体量
以及蛋白液洗脱的总体积来进行预估。
（7）结合比例（DOL）计算
DOL通过下式计算：
DOL = (Amax× Mwt ×  稀释因子)/(ε × C)
a. Amax，稀释因子，C 值在（6）中已经明确；
b. Mwt 是指蛋白的分子量；
c. ε 是 Cy SE 的消光系数；
DOL值会上下波动，但也能得到很好的实验效果。
2. 活体成像领域
（1）实验动物准备
根据实验需求准备需要活体成像的动物，动物分组、阴
性对照、阳性对照根据具体实验设置。
（2）成像
通过尾静脉注射、皮下-注射、原位移植等方法接种
Cy Dye SE或Cy Dye SE标记的生物分子或药物于动物体内。
根据实验要求选择成像时间，对实验动物全身或局部部位进
行荧光扫描，记录动物体内发射荧光的成像图片，分析荧光
复合物（探针、药物）的分布情况。成像结束后，根据实验
需要，选择是否需要解剖内脏进行成像分析。
注：a. 实验动物于成像前 6 h 开始禁食，以降低因胃肠道食
物引起的背景干扰。
b. 用量和时间需要客户根据自己的仪器和药物试
剂等条件优化。
注意事项
1.  溶解后的 Cy SE 溶液 立即使用。
2.  荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光
淬灭。
3.  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅用于科研

Cy SE（Cy琥珀酰亚-胺酯）