Fluo-4, AM ester（钙离子荧光探针）产品说明书
Fluo-4, AM ester（钙离子荧光探针）
产品货号：XK3013S
产品规格：50 μg, 10×50 μg
产品参数
外观：可溶于DMSO的橙红色粉末
Ex/Em：494/516 nm（结合Ca2＋
后）
CAS号：273221-67-3
分子式：C51H50F2N2O23
分子量：1096.94
分子结构图：

储存条件
-20℃干燥避光保存，有效期见外包装。
产品介绍
Fluo-4是一种将Fluo-3结构中的Cl离子替换成F离子的
钙荧光探针。由于将Cl离子替换成了电子吸引力更强的F离
子，它的 激发波长会向短波长方向偏离10 nm左右。这
个波长更接近于氩激光器的波长，所以用氩激光器激发时，
Fluo-4的荧光强度比Fluo-3更强。
Fluo-4, AM ester穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯
酶剪切形成Fluo-4，从而被滞留在细胞内。Fluo-4以游离配
体形式存在时几乎是非荧光性的， 但是与细胞内钙离子结合
后可以产生较强的荧光。 可以使用激光共聚焦显微镜或流式
细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。
使用方法
1. 用无水DMSO溶解Fluo-4, AM ester，配制成2 mM的储液
（将1 mg Fluo-4, AM ester溶于456 μL无水DMSO中）。
2. 用PBS或HBSS稀释Fluo-4, AM ester储液，制备4 μM的
Fluo-4, AM ester工作液。
注：推荐工作液浓度为4-20 μM。为了避免过度加载造成细
胞毒性，建议在取得有效结果的基础上使用 探针浓度，
可从4 μM开始摸索。
3.（可选）如果Fluo-4, AM ester进入细胞的效果不好，可向
Fluo-4, AM ester溶液中加入适量20 % Pluronic F-127溶液，
防止Fluo-4, AM ester在缓冲液中聚集并促进Fluo-4, AM
ester进入细胞，Pluronic F-127终浓度控制在0.04-0.05 %。
注： （1）20 % (w/v) 的Pluronic F-127 DMSO母液配制：100
mg Pluronic F-127中加入0.5 mL DMSO，配制成20 % (w/v)
的DMSO母液。溶解需要在40-50℃加热20-30 min。溶解后
室温保存， 勿冷藏。 如果有结晶析出， 可以重新加热后溶解，
不影响使用。
（2）Pluronic F-127可降低Fluo-4, AM ester的稳定性，
因此只建议在配制工作液时加入，不建议将其加入储液中。
4. 取出预培养的细胞，除去培养基，使用PBS或HBSS溶液
洗涤细胞3次。
5. 去除缓冲液，将 Fluo-4, AM ester 工作液加入细胞中，在
37℃培养 10-60 min。
注：如果 实验不能确定孵育温度和时间，建议尝试37℃
孵育20 min，观察荧光效果。若细胞死亡较多，则适当缩短
时间或降低温度；如果荧光强度太弱，则适当延长时间。
6. 去除Fluo-4, AM ester工作液，用PBS或HBSS等缓冲液洗
涤细胞3次，然后用PBS或HBSS等缓冲液重悬细胞，制成
1×105
cells/mL的细胞悬液。
8. 37℃培养10 min， 确保AM体在细胞内的完全去酯化作用。
9. 进行荧光钙离子检测。
注意事项
1. 如果使用含有血清的培养基，血清中的酯酶会分解AM
ester体，从而降低Fluo-4, AM ester进入细胞的效果。另外，
含有酚红的培养基会使本底值略微偏高， 加工作液前应尽量
去除残留培养基。
2. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光。
3. Fluo-4, AM ester容易吸潮，从冰箱取出后，请确认在干燥
的环境放至室温后开封。由于试剂极微量，开封前请将其短
暂离心，以保证粉末落入管底。
4. Fluo-4, AM ester 遇水极易分解，如果不能一次用完，建
议将储液小量分装保存。
本产品仅用于科研

Fluo-4, AM ester（钙离子荧光探针）