YF®555 Click-iT EdU 流式检测试剂盒（橙红色荧光）产品说明书
YF®555 Click-iT EdU 流式检测试剂盒（橙红色荧光）
产品货号及规格：
货号 产品名称 规格
XK6020S
YF® 488 Click-iT EdU 流式检测试剂盒（绿色荧光）
5T
C6019M 20T
C6019L 50T
C6020S
YF® 555 Click-iT EdU 流式检测试剂盒（橙红色荧光）
5T
C6020M 20T
C6020L 50T
C6021S
YF® 594 Click-iT EdU 流式检测试剂盒（红色荧光）
5T
C6021M 20T
C6021L 50T
C6022S
YF® 647A Click-iT EdU 流式检测试剂盒（远红荧光）
5T
C6022M 20T
C6022L 50T
产品内容：
组分 规格 5T 20T 50T 开封后保存温度 稳定性
A. 10 mM EdU 100 μL 0.4 mL 1 mL -20℃
开封后按指-定温
度保存可有效放
置一年
B. YF® 488/555/594/647A Azide 25 μL 100 μL 250 μL -20℃，避光
C. 10× Click-iT EdU反应缓冲液 500 μL 2×1 mL 5 mL 2-8℃
D. CuSO4 200 μL 0.8 mL 2× 1 mL 2-8℃
E. Click-iT EdU 缓冲液添加物 15 mg 60 mg 150 mg 2-8℃
规格：上述反应次数针对 6孔板培养的细胞，不同容器的具体用量可参考附表 1。
荧光光谱数据：YF® 488 Azide：495/519 nm；YF® 555 Azide：555/565 nm；
YF®594 Azide：590/617 nm；YF® 647AAzide：650/670 nm.
储存条件
-20℃避光保存，有效期见外包装。开封后，保存温度详见
说明书。
产品介绍
细胞增殖检测是评估细胞健康程度、 遗传毒性及抗肿瘤
药物效果的基础实验手段。检测细胞增殖最 的方法是
BrdU法。EdU法检测试剂盒是BrdU法的革命性突破。EdU
（5-乙炔基-2’-脱氧尿苷）是一种嘧啶类似物，在DNA合成
期整合入DNA双链。EdU法检测基于“点击”反应，一种由铜
催化的叠氮化合物和炔烃作用发生共价反应，形成共价键。
本试剂盒中，EdU含有炔烃，YF® 488/555/594/647A
Azide染料含有叠氮化合物。点击法的EdU标记增殖快速有
效，易于使用。BrdU方法需要DNA变性（如酸变性、热变
性或者用DNase消化）暴露出BrdU，方便BrdU抗体结合；
而EdU法只需标准化的多聚甲醛固定和Triton X-100促渗就
可以使检测试剂进入细胞， 只需少量的叠氮化染料即可非常
有效地标记出整合的EdU。
本试剂盒包含EdU法检测所需要的所有组分，可以用于
体外培养细胞的增殖检测。

使用方法
实验材料（自备）
? 10 mM PBS, pH 7.2-7.6
? 中性多聚甲醛固定液（in PBS）
? 促渗试剂（0.5 % Triton X-100 in PBS）
? 1 % BSA in PBS, pH 7.4
? ddH2O
实验步骤
1. EdU 标记细胞
（1）每孔 1×105
~3×106
个细胞接种于 6 孔板中，培养至正
常状态后进行药物处理或其他刺激处理。
（2）培养基稀释 10 mM EdU至合适浓度， 阴性对照组不用
EdU处理。
注：EdU 的标记浓度需根据细胞类型加以调整，建议以 10
μM 的初始浓度进行摸索。预实验中，建议设置 EdU 浓度梯
度，可参考附表 2和附表 3。
（3）细胞培养箱中孵育一段时间。EdU孵育细胞的时间可
以直接用作测定细胞 DNA 合成的指标，时间点选择以及孵
育的时间取决于细胞生长速率。通过短暂的 EdU 孵育进行
的脉冲式标记细胞可以用于研究细胞周期动力学。
注：EdU 浓度与孵育时间相关，短时间孵育（<2 h）宜采用
高浓度，如：10~50 μM；长时间孵育（>24 h）宜采用低浓
度，如：1~10 μM；也可参考附表 3。
2. 细胞固定及促渗
注：对于需要做细胞表面抗原标记的实验，可以考虑在完成
EdU 孵育后，以含 1 % BSA 洗涤细胞 2 次，在细胞固定促
渗之前进行。
（1）孵育完成后，收集细胞，1 % BSA清洗细胞1次，离心
收集细胞。
（2）100 μL 4 % 多聚甲醛重悬细胞。
（3）室温避光孵育 15 min。
（4）1 % BSA 洗涤细胞 2次。
（5）100 μL 0.5 % Triton X-100促渗液重悬细胞，室温孵育
20 min。
3. EdU 检测
注：针对 6孔板样本可参考每孔 1 mL 的工作液来进行，用
户可以根据自己的样本情况调整用量。
（1）配置1× Click-iT EdU反应缓冲液：用ddH2O将组分C稀
释10倍。
（2）配置 5× Click-iT EdU缓冲液添加物 （组分 E） ： 加 600
μLddH2O 至 60 mg 的组分 E试管中（终浓度 100 mg/mL），
混匀至全部溶解。使用后，剩余储液存放在-20℃，可保存
一年，溶液一旦呈现棕色，则说明有效成分降解不能再用。
注： 不同规格的组分E均按照此比例加ddH2O溶解为5× 储
液备用。对于50T 的规格，需添加1.5 mL ddH2O。
（3）准备1× Click-iT EdU缓冲液添加物：以ddH2O稀释5×
Click-iT EdU缓冲液添加物储液至1×，溶液应现配现用。
（4）依据表 1准备 Click-iT工作液。
表1: Click-iT 工作液
反应组分 单次反应所需
加液体积
1× Click-iT EdU 反应缓冲液 875 μL
CuSO4 （组分 D） 20 μL
YF® 488/555/594/647A Azide（组分
B）
5 μL
1× Click-iT EdU 缓冲液添加物 100 μL
总体积 1 mL
（5）每管加入 1 mL Click-iT 工作液，混匀。
（6）室温避光孵育 30 min。
（7）1% BSA洗涤细胞 1 次，收集细胞，用 1 mL 1 % BSA
再次重悬细胞 （重悬细胞的溶液体积可根据细胞的数量加以
调整），流式细胞仪检测。
注：如需进行其他标志物检测可参考步骤 4。
4. 细胞内抗原标记（可选步骤）
（1）加入抗体工作液，混匀。
（2）避光条件下，以合适的温度及时间孵育抗体。
5. DNA 含量计算（可选步骤）
（1）如有需要，可加入适量 RNase 至每管，混匀。
（2）每管加入适量 DNA 染色液，避光孵育 10-15 min。
（3）上机待检。
附录：
附表 1. EdU 培养基及染色反应液的参考使用量
96 孔板* 48 孔板 24 孔板 12 孔板 6 孔板 5.5 cm 小皿
EdU培养基 100 μL 150 μL 200 μL 500 μL 1 mL 2 mL
染色反应液 100 μL 150 μL 200 μL 500 μL 1 mL 2 mL
注：（1）*表示贴壁细胞通常采用的培养容器，EdU培养基和染色反应液用量以覆盖细胞为宜；（2）悬浮细胞 EdU 用量依
据培养体积而定。
附表 2. EdU 的参考孵育时间
细胞系 人胚胎细胞 酵母细胞 鼠成纤维细胞 人宫颈癌细胞 人胚肾细胞系 人神经细胞
细胞周期 ~30 min ~3 h ~18 h ~21 h ~25 h ~5 d
孵育时间 5 min 20 min 2 h 2 h 2 h 1 d
注：（1）EdU孵育时间取决于细胞周期，一般为细胞周期的 1/10至1/5，但大多数细胞系均可采用 2 h孵育时间；
（2）考虑到细胞培养基、温度、湿度、光线等其他因素的影响，细胞周期会有所变化。
附表 3. 文献中EdU 孵育浓度及时间
PubMed ID Reference Cell Line Concentration Time
18272492 Salic A,et al.PNAS.2008 NIH3T3,Hela 10 nM~10 μM 1 h
18521918 Cappella P, et al. Cytometry A.2008 HL-60,A2780,U2OS 1~10 μM 0.5 h
18996411 Chehehasa F, et al.Neurosci Methods.2009 Neurospheres 1~20 μM 24 h
19179371 Limsirichaikul S, et al.Nucleic Acids Res.2009 Primary fibroblasts 10 μM 1,2,4 h
19253396 Warren M, et al. Dev Dyn.2009 Chick embryos 10 μM~2 mM 4 h
19647746 Yu Y, et al. J Immunol Methods.2009 Spleen cells 50 μM 24 h
19544417 Momcilovic O, et al.Stem Cells.2009 Human ES cells 10 μM 0.5 h
20080700 Cinquin O, et al. PNAS.2010 emb-30 1 μM 12 h
20025889 HanW, et al. Life Sci.2009 VSMC 50 μM 2 h
20659708 Huang C, et al. J Genet Genomics.2010 ESC 50 μM 2 h
21310713 Hua H, et al. Nucleic Acids Res.2011 Fission yeaststrains 10 μM 3 h
20824490 Lv L, et al.Mol Cell Biochem.2011 EJ cells 50 μM 4 h
21248284 Yang S, et al.Biol Reprod.2011 GC cells 50 μM 2 h
21227924 Zhang YW, et al. Nucleic Acids Res.2011 U2OS, HT29 30 μM 1.5 h
21829621 Guo T, et al.PloS One. 2011 HIT-T15 50 μM 4 h
21980430 Zeng T, et al.PloS One. 2011 MCF-10A 25 μM 2 h
22012572 Ding D, et al.Int Orthop.2011 C3H10T1/2 10 μM 24 h
22000787 ZengW, et al. Biomaterials.2011 EPC 50 μM 4 h
21913215 Xue Z, et al. J Cell Biochem.2011 SGC7901 25 μM 24 h
22016038 Peng F, et al.Lasera Med Sci.2011 MSC 50 μM 2 h
21878637 Li D, et al. J Biol Chem.2011 HCC 50 μM 2 h
本产品仅用于科研

YF®555 Click-iT EdU 流式检测试剂盒（橙红色荧光）