Hoechst 33258活细胞 DNA染料 产品说明书 
Hoechst 33258活细胞 DNA染料 
产品货号：XK4046
产品规格：10 mg 
应用范围：核酸染色 
 产品参数 
外观：可溶于水的黄色固体 
Ex/Em（结合 DNA）= 352/461 nm 
Ex/Em（未结合 DNA）= 346/460 nm 
CAS 号：23491-45-4   
分子式：C25H24N6O ? 3HCl   
分子量：533.88 
分子结构图： 
 储存条件 
-20℃避光保存，有效期见外包装。 
 
产品介绍 
Hoechst 33258，也称 bis Benzimide H 33258 或 HOE 
33258，是一种非嵌入性的亮蓝色荧光染料。染料在溶液中
荧光较弱，但在 AT 序列富集区域的小沟处与 DNA 结合后
荧光变得明亮，故此类染料也被称为 DNA探针。因背景较
低，故染色细胞不需洗涤步骤，且染色非常稳定，对活细胞
无毒，结合 DNA 染色后可持续几天或更长时间。Hoechst 
33258 与 Hoechst 33342 相比在水中的溶解度要高，但两种
染料均具有高细胞膜渗透性，被广泛用于细胞凋亡检测，染
色后可用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。 
 
实验步骤 
1. 工作液配置 
（1）向 EP 管中加入 1 mL ddH2O 配置 10 mg/mL储液。 
（2）用PBS 按照 1:2000 稀释Hoechst 33258 储液至终浓度
为 5 μg/mL的工作液。 
2. 染色 
（1）对于固定的细胞或组织 
a.  对于细胞或组织样品，固定后适当洗涤去除固定剂。如需
免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后
续步骤进行 Hoechst 33258 染色。 
b.  对于贴壁细胞或组织切片，加入少量 Hoechst 33258 工作
液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待测染色样
品体积 3 倍的染色液，混匀。室温放置 3-5 min。 
c.  吸除 Hoechst 33258 染色液，用 TBST、PBS 或生理盐水
洗涤 2-3 次，每次 3-5 min。 
注：清洗步骤可选但不是必须的，清洗后不影响染色。 
d.  直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。
细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或
呈碎块状致密浓染。 
（2）对于活细胞或组织 
a.  加入适量Hoechst 33258工作液，充分覆盖待染色的样品，
通常对于六孔板每孔需加入 1 mL 的染色液，对于 96 孔板
每孔需加入 100 μL的染色液。 
b.  室温避光孵育10-20 min。 
c.  弃染色液，用PBS 洗涤 2-3次即可进行荧光检测。 
注：清洗步骤可选但不是必须的，清洗后不影响染色。 
 注意事项   
1. Hoechst 染料通常用于染色哺乳动物细胞，但是也可以用
来染色死活细菌，染色死活细菌时推荐在PBS或150 mM的
NaCl 中溶解为终浓度 12-15 μg/mL 的染色液室温染色 30 
min。对酵母的染色较弱。通常对于死细胞的染色要比活细
胞染色亮度高。                                                                                                               
2. Hoechst 33258 染料溶于水时溶解度可达 10 mg/mL，用于   
                                       
细胞核染色时，推荐的 Hoechst 33258 工作浓度为 0.5-10 
μg/mL，客户可根据实际染色情况对染色液浓度及染色时间
上下摸索。 
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。  
4. 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检
测。
本产品仅用于科研

Hoechst 33258活细胞 DNA染料