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      产品分类
    Rhodamine-Phalloidin 罗丹明标记鬼笔环肽(橙红)
    物品单位 价格 品牌
    590 XKBio
    • 产地:上海
    • 型号:50T
    • 货号:XK0063S
    • 发布日期: 2022-03-25
    • 更新日期: 2022-03-25
    产品详细说明
    产地 上海
    品牌 XKBio
    货号 XK0063S
    用途范围 科研
    纯度 100%
    CAS编号
    规格 50T
    是否进口

    Rhodamine-Phalloidin 罗丹明标记鬼笔环肽(橙红)产品说明书
    Rhodamine-Phalloidin 罗丹明标记鬼笔环肽(橙红)
    产品货号:XK0063S
    产品规格:50T,300T
    产品参数
    Ex/Em:546/575 nm
    储存条件
    -20℃干燥、避光保存,有效期见外包装。若配制成水溶液,
    应小量分装保存。
    产品介绍
    鬼笔环肽是从致命的伞形毒蕈蘑菇中分离出来的一种
    毒素。它是特异性结合于 F-肌动蛋白的双环肽。因此用荧
    光染料标记的鬼笔环肽可以非常方便的研究 F-肌动蛋白的
    分布。鬼笔环肽内部,在半胱氨酸和色氨酸之间含有不常见
    的硫醚桥形成内环结构。在pH 升高时,该硫醚被裂解,鬼
    笔环肽失去对肌动蛋白的亲和力。
    在各种植物细胞或动物细胞中,标记的鬼笔环肽对大、
    小细丝具有相似的亲和力, 平均每个肌动蛋白亚基结合一个
    鬼笔环肽分子。不同于抗体,鬼笔环肽与肌动蛋白的结合亲
    和力在不同物种间没有显着变化。 非特异性染色可以忽略不
    计,染色和未染色-区域之间的对比度非常大。鬼笔环肽将单
    体/聚合物的平衡转向聚合状态,将聚合临界浓度降低至 30
    倍。Phallotoxins 可通过抑制细胞松弛素的解聚,碘化钾和
    升高的温度,稳定 F-肌动蛋白。因为鬼笔环肽缀合物很小,
    大约直径 12-15埃,分子量<2000道尔顿,多种肌动蛋白结
    合蛋白,包括肌球蛋白,原肌球蛋白和后肌钙蛋白依然可以
    和鬼笔环肽标记的肌动蛋白结合。更重要的是,鬼笔环肽标
    记的肌动蛋白丝保持功能,标记甘油肌纤维仍然收缩,标记
    的肌动蛋白丝仍然可以继续移动。 而且荧光标记的鬼笔环肽
    也可用于对细胞中 F-肌动蛋白进行定量研究。


    使用方法
    1. 储液制备
    Rhodamine-Phalloidin: 取适量甲醇或无菌水溶解棕色管
    中冻干的粉末,制备成 200T/mL 的储液(300T 规格染料加
    入1.5 mL的液体, 50T规格染料加入0.25 mL的液体即可) 。
    Rhodamine-Phalloidin的一个单位(T)的定义是染色一
    个加载细胞的载玻片所用染料的量。 对于罗丹明标记的鬼笔
    环肽,使用时的推荐稀释比例为 1: 40-1: 200,一个单位相
    当于 200 μL 总染色体积中加入1-5 μL 200T/mL 储备溶液。
    注:稀释比例可以根据实际染色效果进行适当调整。
    2. 固定细胞染色
    以下方案是针对生长在玻璃盖玻片或 8 孔室玻片上的
    贴壁细胞的染色步骤。 鬼笔环肽也可用于染色固定的冷冻或
    石蜡组织切片。
    (1)用PBS清洗细胞 3次。
    (2)用含有3.75%甲醛的 PBS溶液固定细胞,冰上固定 15
    min。
    注:甲醇可以在固定过程中破坏肌动蛋白。因此 避免含
    有任何甲醇的固定剂。优选的固定剂是不含甲醇的甲醛。
    (3)用PBS清洗细胞 3次。
    (4) 用含 0.5% Triton X-100的PBS 溶液在室温下透化细胞
    10min。
    (5)用PBS清洗细胞 3次。
    (6)用 200 μL PBS稀释 1-5 μL 荧光标记的鬼笔环肽储液,
    加入一个盖玻片或孔中,室温孵育 20 min,进行染色。
    注:染色体积可根据样本情况进行调节。孵育过程中为避免
    染液挥发,可将盖玻片放于密封容器内。
    (7)用 PBS清洗细胞 2-3次。
    (8)荧光显微镜观察。标记的鬼笔环肽具有很好的光稳定,
    样品可以在 PBS 中成像,但为了效果 ,也可以使用抗
    荧光淬灭剂观察。
    3. 活细胞染色
    荧光标记的鬼笔环肽不具有细胞透性, 因此没有被广泛
    用于活细胞标记。然而,有报道称活细胞可能通过胞饮或未
    知机制进行标记。 一般来说, 染色活细胞时需要更多的染料。
    或者, 荧光标记的鬼笔环肽也可被注入到细胞中用于监测肌
    动蛋白分布和细胞运动。
    注意事项
    本产品为冻干粉形式,微量不易观察,使用前请瞬时
    离心,加适当溶剂溶解后使用,溶解后的溶液近乎透明色。
    本产品仅用于科研

    Rhodamine-Phalloidin 罗丹明标记鬼笔环肽(橙红)