上海晅科生物科技有限公司
    咨询热线
    021-62457717
      产品分类
    488 Click-iT EdU成像试剂盒(绿色荧光)
    物品单位 价格 品牌
    213 XKBio
    • 产地:上海
    • 型号:20T
    • 货号:XK6015S
    • 发布日期: 2022-03-24
    • 更新日期: 2022-03-28
    产品详细说明
    产地 上海
    品牌 XKBio
    货号 XK6015S
    用途范围 科研
    纯度 100%
    CAS编号
    规格 20T
    是否进口
    488 Click-iT EdU成像试剂盒(绿色荧光) 产品说明书
    488 Click-iT EdU成像试剂盒(绿色荧光)
    货号 :XK6015S
    产品内容:
    组分 规格 20T 100T 500T 1000T 开封后保存温度 稳定性
    A. 10 mM EdU 40 μL 0.2 mL 1 mL 2× 1 mL -20℃
    开封后按指-定
    温度保存可有
    效放置一年
    B. YF® 488/555/594/647A Azide 4 μL 20 μL 100 μL 200 μL -20℃,避光
    C. 10× Click-iT EdU 反应缓冲液 200 μL 1 mL 5 mL 10 mL 2-8℃
    D. CuSO4 100 μL 0.5 mL 2× 1.25 mL 5 mL 2-8℃
    E. Click-iT EdU 缓冲液添加物 6 mg 30 mg 150 mg 2 × 150 mg 2-8℃
    F. Hoechst 33342 5 μL 25 μL 125 μL 250 μL 2-8℃
    规格:上述反应次数针对 96孔板培养的细胞,不同容器的具体用量可参考附表 1。
    荧光光谱数据:YF® 488 Azide:495/519 nm;YF® 555 Azide:555/565 nm;YF®594 Azide:590/617 nm
    YF® 647AAzide:650/670 nm;Hoechst 33342:350/461 nm(bound to DNA)
    储存条件
    -20℃避光保存,有效期见外包装。开封后,保存温度详见
    说明书

    产品介绍

    细胞增殖检测是评估细胞健康程度、 遗传毒性及抗肿瘤
    药物效果的基础实验手段。检测细胞增殖最 的方法是
    BrdU法。EdU法检测试剂盒是BrdU法的革命性突破。EdU
    (5-乙炔基-2’-脱氧尿苷)是一种嘧啶类似物,在DNA合成
    期整合入DNA双链。EdU法检测基于“点击”反应,一种由铜
    催化的叠氮化合物和炔烃作用发生共价反应,形成共价键。
    本试剂盒中,EdU含有炔烃,YF® 488/555/594/647A
    Azide染料含有叠氮化合物。点击法的EdU标记增殖快速有
    效,易于使用。BrdU方法需要DNA变性(如酸变性、热变
    性或者用DNase消化)暴露出BrdU,从而方便BrdU抗体结
    合;而EdU法只需标准化的多聚甲醛固定和Triton X-100促
    渗就可以使检测试剂进入细胞, 只需少量的叠氮化染料即可
    非常有效地标记出整合的EdU。
    本试剂盒包含EdU法检测所需要的所有组分,可以用于
    体外培养细胞的增殖检测。
    使用方法
    实验材料(自备)
    ? 10 mM PBS, pH 7.2-7.6
    ? 4 %多聚甲醛固定液(in PBS)
    ? 促渗试剂(0.5 %Triton X-100 in PBS)
    ? 2 mg/mL 甘氨酸溶液(in ddH2O)
    ? 3 %BSA in PBS, pH 7.2-7.6
    实验步骤
    1. EdU标记细胞
    (1)以每孔4×103
    -1×105
    细胞接种于96孔板中,培养至正常
    状态后进行药物处理或其他刺激处理。
    (2)培养基稀释 10 mM EdU至合适浓度,阴性对照组不用
    EdU处理。
    注:EdU 的标记浓度需根据细胞类型加以调整,建议以 10
    μM的初始浓度进行摸索。预实验中,建议设置 EdU浓度梯
    度,可参考附表 2和附表 3。
    (3)细胞培养箱中孵育一段时间。
    注:EdU浓度与孵育时间相关,短时间孵育(<2 h)宜采用
    高浓度,如:10~50 μM;长时间孵育(>24 h)宜采用低浓
    度,如:1~10 μM;也可参考附表 3。
    2. 细胞固定及促渗
    (1)孵育完成后,去除培养基。加入50 μL 4 % 多聚甲醛
    固定液,室温孵育15-30 min后,去除固定液。
    (2)每孔加入50 μL 2 mg/mL甘氨酸溶液,室温孵育5 min,
    中和残留的固定液。
    (3)以每孔100 μL 3 % BSA洗涤细胞2次。
    (4)去除洗涤液,加入100 μL 0.5 % Triton X-100,室温孵
    育20 min。
    (5) 去除促渗剂, 每孔100 μL的 3% BSA 洗涤液洗涤 2次。
    3. EdU检测
    注:本参考步骤每个样本使用100 μL的工作液,用户可以根
    据自己的样本情况调整用量。
    (1)配置1× Click-iT EdU反应缓冲液(组分C):用ddH2O
    将组分C稀释10倍。
    (2)配置5× Click-iT EdU缓冲液添加物 (组分E) : 加300 μL
    的ddH2O至30 mg的E组分管中(终浓度100 mg/mL),混匀
    至全部溶解。使用后,剩余储液存放在-20℃,可保存一年,
    溶液一旦呈现棕色,则说明有效成分降解不能再用。
    注:不同规格的组分E均按照此比例加ddH2O溶解,制备成
    5× 储液备用。
    (3)准备1× Click-iT EdU缓冲液添加物:用ddH2O稀释5×
    Click-iT EdU缓冲液添加物至1×,溶液应现配现用。
    (4)依据表 1准备 Click-iT工作液。
    表1: Click-iT 工作液
    反应组分 以10个孔的
    样本数为例
    1× Click-iT EdU反应缓冲液 860 μL
    CuSO4 (组分 D) 40 μL
    YF® 488/555/594/647AAzide(组分B) 2 μL

    本产品仅用于科研

    488 Click-iT EdU成像试剂盒(绿色荧光)