上海晅科生物科技有限公司
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      产品分类
    JC-1线粒体膜电位检测试剂盒
    物品单位 价格 品牌
    560 XKBio
    • 产地:上海
    • 型号:20T
    • 货号:XK6004S
    • 发布日期: 2022-03-24
    • 更新日期: 2022-03-24
    产品详细说明
    产地 上海
    品牌 XKBio
    货号 XK6004S
    用途范围 科研
    纯度 100%
    CAS编号
    规格 20T
    是否进口
    JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒产 品 说 明 书
    JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒
    产品货号:XK6004S
    产品规格:20T, 100T
    产品内容:
    组分 J6004S (20T) J6004L (100T)
    A: JC-1, 100× in DMSO 100 μL 500 μL
    B: 10× Assay Bu?er 2 × 1 mL 10 mL
    C: CCCP, 50 mM 10 μL 50 μL
    储存条件
    4℃避光冷藏,并尽量避免反复冻融。有效期见外包装。
    光谱特性
    Ex/Em:510/527 nm (单体物,绿色);
    585/590 nm (聚合物,红色)
    产品介绍
    线粒体膜电位降低是细胞早期凋亡的一个标志, 它发生
    在细胞膜上的磷酯酰丝氨酸外翻与 Caspase 水解酶激活之
    前。当线粒体膜通透性发生改变时,膜电位会降低。这种膜
    电位的改变是由于 Bax 二聚体的形成和 Bid, Bak, Bad 的激
    活,从而诱导线粒体膜形成孔隙造成的。当这些促凋亡蛋白
    被激活时,线粒体同时也将细胞色素 C 释放到细胞质中。
    JC-1 是一种广泛用于检测线粒体膜电位△ Ψm 的理想
    荧光探针,它可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。
    在线粒体膜电位较高时,JC-1 聚集在线粒体的基质中,形
    成聚合物,产生红色荧光;在线粒体膜电位较低时,JC-1
    不能聚集在线粒体的基质中,此时 JC-1 为单体,可以产生
    绿色荧光。通过 JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变可以很
    容易地检测到膜电位的下降,同时也可以用 JC-1 从红色荧
    光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
    JC-1 单体的 激发波长为 510 nm, 发射波长为
    527 nm;JC-1 聚合物的 激发波长为585 nm, 发射
    波长为 590 nm。这款试剂盒操作简单快速,可以通过流式
    细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪检测。
    使用方法
    1. 试剂准备
    配制 JC-1 工作液
    按如下方案配置 1 mL 1×JC-1 染色工作液:取 10 μL
    100×JC-1染色液,加入到 890 μL 灭菌的 diH2O 中,涡旋混
    匀,向上述混合液中加入 100 μL 10× Assay Buffer,涡旋混
    匀,即可得到 1×JC-1 染色液。
    注:①配置体积可同比例扩大或缩小。
    ②不建议直接用1×Assay Buffer稀释100×JC-1染色液,
    可能会出现沉淀。
    配制 1× Assay Buffer
    用 diH2O 按10: 1稀释检测缓冲液, 如 1 mL 10×assay buffer
    + 9 mL diH2O
    2. 流式细胞染色方案
    细胞染色
    开始实验之前,请确保 JC-1和 CCCP溶液已恢复至室温。
    (1)按实验所需,在培养板中接种细胞(悬浮细胞不要超过 106
    个/mL)。
    (2)阳性对照组:根据培养基的量加入相应体积 50 mM 的
    CCCP 溶液 (如终浓度为 50 μM即 1 mL 培养基加入 1 μL 50
    mM 的 CCCP溶液),37℃孵育 20 min。对于特定的细胞,
    CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相
    关文献资料确定。
    (3)对于贴壁细胞,染色前先进行消化处理,将其制成细
    胞悬液,0.5 mL装于离心管中。
    (4)室温下 400 × g,离心 5 min。
    (5)除去上清。
    (6)用 0.5 mL 的JC-1 工作液重悬细胞。
    (7)置于 37℃细胞培养箱,孵育 15 min。
    (8)室温下 400 × g,离心 5 min,去除上清。
    (9)用 2 mL 的 PBS 缓冲液、培养基或 1× Assay Buffer 重
    悬细胞,离心去除上清,重复一次。
    (10)用 0.5 mL 的 PBS、培养基或 1× Assay Buffer 重悬细
    胞,用流式细胞仪检测分析。
    流式细胞仪定量分析
    对于正常细胞,在 PE 或 PI(FL2)通道可以检测到线
    粒体内的 JC-1 红色聚集物;对于凋亡细胞,在 FITC(FL1)
    通道可以检测到 JC-1 绿色单体物。
    3. 荧光显微镜染色方案
    悬浮细胞染色
    (1)参照流式细胞仪染色方案,对细胞进行染色。
    (2)用 0.3 mL 的PBS 或培养基重悬细胞。
    贴壁细胞染色
    (1)在培养皿或培养板上接种细胞。
    (2)阳性对照组:根据培养基的量加入相应体积 50 mM 的
    CCCP 溶液 (如终浓度为 50 μM即 1 mL 培养基加入 1 μL 50
    mM 的 CCCP溶液),37℃孵育 20 min。对于特定的细胞,
    CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相
    关文献资料确定。
    (3)去除培养基,加入JC-1 工作液使其覆盖细胞表面。
    (4)置于37℃细胞培养箱,孵育 15 min。
    (5)除去染液,用PBS 缓冲液、培养基或1× Assay Buffer
    清洗一次细胞。
    (6)用荧光显微镜观察分析。
    荧光显微镜成像
    采用可以同时检测荧光素和罗丹明,或者荧光素与
    Texas Red 的双通道滤波器荧光显微镜观察细胞。对于正常
    细胞,拥有完整的线粒体膜电位,线粒体在 590 nm处发出
    红色荧光,细胞质发出绿色荧光;对于凋亡或坏死的细胞,
    染料以单体形式存在,在 530 nm处发出绿色荧光。
    4. 测定荧光相对比率染色方案
    (1)按照实验要求在96孔板中接种细胞。
    (2)阳性对照组:根据培养基的量加入相应体积 50 mM 的
    CCCP 溶液 (如终浓度为 50 μM即 1 mL 培养基加入 1 μL 50
    mM 的 CCCP溶液),37℃孵育 20 min。对于特定的细胞,
    CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相
    关文献资料确定。
    (3)根据荧光显微镜细胞染色方案对细胞进行染色处理。
    (4)用荧光酶标仪检测荧光值(红色荧光:Ex/Em=550/600
    nm;绿色荧光 Ex/Em=485/535 nm)。
    (5)计算红绿荧光比值。
    (6)与正常细胞相比,在凋亡或坏死细胞中,红绿荧光比
    值会降低。

    本产品仅用于科研

    JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒