上海晅科生物科技有限公司
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      产品分类
    594 TUNEL 细胞凋亡试剂盒(红色荧光)
    物品单位 价格 品牌
    1106 XKBio
    • 产地:上海
    • 型号:20T
    • 货号:XK6014S
    • 发布日期: 2022-03-24
    • 更新日期: 2022-03-28
    产品详细说明
    产地 上海
    品牌 XKBio
    货号 XK6014S
    用途范围 科研
    纯度 100%
    CAS编号
    规格 20T
    是否进口
    488/555/594/640/Cy3 TUNEL 细胞凋亡试剂盒产品说明书
    488/555/594/640/Cy3 TUNEL 细胞凋亡试剂盒
    产品货号 :XK6014S
    产品内容:
    组分
    规格
    20T 50T
    A. TUNEL Equilibration Buffer 2×1 mL 5 mL
    B. YF®488/555/594/640/Cy3 TUNEL Reaction Buffer 1 mL 2 × 1.25 mL
    C. TdT Enzyme 20 μL 50 μL
    D. Proteinase K (2 mg/mL) 40 μL 100 μL
    E. DNase I (2 U/μL) 5 μL 13 μL

    F. 10 × DNase I Buffer 100 μL 260 μL

    储存条件

    本产品应置于-20℃储存,组分B 需避光,避免反复冻
    融。有效期见外包装。注:组分 A和 B 使用时请佩戴口罩、
    手套,接触皮肤,请立即用大量水冲洗。
    产品介绍
    细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体 DNA 的降解,这种
    降解非常特异并有规律,所产生的不同长度的 DNA 片段为
    180 bp-200 bp的整数倍, 表现为琼脂糖凝胶电泳中呈现特异
    的梯状 Ladder 图谱。本试剂盒采用 TUNEL 法,应用末端
    脱 氧 核 糖 核 苷 酸 转 移 酶 ( Terminal Deoxynucleotidyl
    Transferase, TdT)在凋亡细胞中断裂 DNA 的 3′-OH 末端催2 / 3
    生物荧光试剂
    本产品仅用于科研
    化掺入 YF®/Cy-dUTP, YF®/Cy-dUTP 标记的 DNA 可以用荧
    光显微镜直接观察或者用流式细胞仪定量。TUNEL 法可以
    选择性的检测凋亡细胞, 而非坏死细胞或因辐照和药物
    而造成的 DNA 链断裂的细胞。标记的 dUTP(如地-高辛
    -dUTP、生物素-dUTP),可以直接进行原位检测,是一种
    更快速、直接的检测手段。
    使用方法
    实验材料(自备)
    ? PBS缓冲液(pH~7.4)
    ? 4%多聚甲醛(PBS配制)
    ? 牛血清白蛋白(BSA)或正常的羊、牛血清
    ? 70%乙醇(自选)
    ? 脱蜡溶剂(石蜡切片样本)
    实验步骤
    1. 样本准备:
    (1)细胞样品
    a. 可选: 准备一份阴性对照样本 (加入不含TdT酶的TUNEL
    反应液)。
    b. PBS 清洗细胞两次。
    c. 细胞固定: 加适量4%多聚甲醛 (pH 7.4) , 4℃放置 30 min,
    d. PBS 清洗细胞两次。
    e. 通透细胞:细胞可用配制于 PBS 中的 0.2% Triton X-100
    溶液通透,室温放置 20 min。
    f. PBS清洗细胞两次。
    (2)石蜡组织切片
    a. 室温下用二甲苯浸泡石蜡组织切片 2次,每次 5 min,以
    脱掉石蜡。
    注:二甲苯有毒,易挥发,请在通风橱中进行此操作。
    b. 室温下, 将样本浸没于无水乙醇中漂洗 2次, 每次 5 min。
    c. 室温下,将切片样本连续依次浸没在不同浓度梯度的乙
    醇(95%、90%、80%、70%)中,每种浓度各漂洗 1 次,
    每次 5 min。
    d. 室温下,将切片浸没于纯水中漂洗 3 min,再将切片浸没
    于1×PBS中漂洗3 min, 用滤纸小心吸干切片样本周围液体。
    e. 用免疫组化笔描绘样本轮廓,以便下游通透与标记。
    f. 按 1: 100的比例, 将 2 mg/mL 的蛋白酶 K 溶液用 1× PBS
    稀释至终浓度 20 μg/mL,在每个样本上滴加 100 μL,使溶
    液覆盖全部样本区域,室温孵育 20 min。(蛋白酶 K 的孵
    育时间、温度需根据不同类型组织样本进行优化)。
    注:蛋白酶 K 可以帮助渗透组织,时间短达不到通透效果,
    但延长孵育时间可能导致切片脱落。 一般情况下, 厚度 4 μm
    孵育 10 min,厚度 30 μm孵育 30 min。
    g. PBS浸润清洗切片 2 次,每次5 min,用滤纸吸去多余的
    液体,将处理好的样品放在湿盒中保持湿润。
    注:这一步必须把蛋白酶 K 洗涤干净,否则会严重干扰后
    续的标记反应。
    (3)冰冻组织切片
    a. 将冰冻切片放置于室温的片架上,室温 20 min,晾干。
    b. 将载玻片浸没在 4%多聚甲醛溶液中,室温固定 30 min。
    c. PBS浸润清洗切片 2次,每次 5 min。
    d. 用滤纸小心吸干切片样本周围液体。
    e. 按1: 100的比例, 将 2 mg/mL 的蛋白酶 K 溶液用 1× PBS
    稀释至终浓度 20 μg/mL,在每个样本上滴加 100 μL,使溶
    液覆盖全部样本区域,室温孵育 20 min。(蛋白酶 K 的孵
    育时间、温度需根据不同类型组织样本进行优化)。
    注:蛋白酶 K 可以帮助渗透组织,时间短达不到通透效果,
    但延长孵育时间可能导致切片脱落。 一般情况下, 厚度 4 μm
    孵育 10 min,厚度 30 μm孵育 30 min。
    f. PBS 浸润清洗切片 2 次,每次 5 min,用滤纸吸去多余的
    液体,将处理好的样品放在湿盒中保持湿润。
    (4)阳性处理(仅阳性对照进行此步骤,其他样品直接进
    行 TUNEL反应步骤)
    a. 按1: 10的比例用ddH2O将10× DNase I Buffer稀释成1×
    DNase I Buffer 备用。
    b. 滴加 100 μL 1× DNase I Buffer 到已通透的样本上,覆盖
    全部样本区域,室温平衡 5 min。
    c. 用 1× DNase I Buffer 以 1: 100稀释 DNase I (2 U/μL)至终3 / 3


    生物荧光试剂
    本产品仅用于科研
    浓度 20 U/mL的工作液。
    d. 轻轻吸掉多余液体,加入 100 μL 浓度为 20 U/mL 的
    DNase I 工作液,室温孵育10 min。
    e. 轻轻吸掉多余液体,PBS清洗样品 2次。
    2. TUNEL 反应
    (1)每个样本加入 100 μL TUNEL Equilibration Buffer,室
    温孵育 5 min。
    (2)预先配制 TUNEL 反应混合液:每 50 μL TUNEL
    Reaction Buffer 中加入 1 μL TdT 酶。
    (3)弃去 TUNEL Equilibration Buffer,每个样本加入 50 μL
    TUNEL 反应混合液。
    a. 贴壁细胞,用盖玻片使缓冲液均匀覆盖样本。37℃避光
    孵育 60 min。
    b. 悬浮细胞,可加入微孔板中,采用微孔板振荡器进行孵
    育或每隔 15 min 温和的震荡反应管,使之充分反应。37℃
    避光孵育 60 min。
    c. 组织样本,用盖玻片使缓冲液均匀覆盖样本。将样本平
    放于湿盒内,37℃恒温箱孵育2 h(湿盒底部铺一张含少量
    水的纸巾保持湿度)。
    (4)去掉反应液,在 1× PBS 的染色缸中浸泡润洗2 次,每
    次 5 min。再使用适量配制于 PBS中的 0.1% Triton X-100,
    其中含 5 mg/mL BSA 的缓冲液清洗样本 3次,每次 5 min,
    以降低背景。
    (5)(可选)复染:每个样本滴加浓度为 2 μg/mL 的DAPI
    染液,室温避光孵育 10 min。染色完成后,去掉染液,并将
    样本在 1× PBS中浸泡润洗 3次,每次 5 min。
    (6)(可选)石蜡切片封片:将切片依次在纯水、70%乙
    醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、无水乙醇中浸没 5 min,
    将切片样本置于染色缸中以新鲜的二甲苯浸泡, 透明化
    处理 2次,每次 5 min。脱水完成后,擦去切片周围的液体,
    每个样本滴加 50 μL 抗荧光淬灭封片液,盖上盖玻片,用镊
    子的钝端轻轻敲击盖玻片,去除气泡以使封片完全。
    (7)用荧光显微镜或流式细胞仪观察。(凋亡细胞应被标
    记上明亮的荧光,没有加入 TdT 酶的阴性对照样本不能被
    标记上荧光)。
    注意事项
    1. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注
    意避光,以减缓荧光淬灭。
    2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
    488/555/594/640/Cy3 TUNEL 细胞凋亡试剂盒