上海晅科生物科技有限公司
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      产品分类
    Annexin V-APC 偶联物
    物品单位 价格 品牌
    390 XKBio
    • 产地:上海
    • 型号:0.1 mL
    • 货号:XK6080S
    • 发布日期: 2022-03-24
    • 更新日期: 2022-03-24
    产品详细说明
    产地 上海
    品牌 XKBio
    货号 XK6080S
    用途范围 科研
    纯度 100%
    CAS编号
    规格 0.1 mL
    是否进口
    Annexin V-APC偶联物产品说明书
    Annexin V-APC偶联物
    产品货号:XK6080S
    产品规格:0.1 mL, 1 mL
    储存条件
    4℃避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。
    光谱特性
    Annexin V-APC:Ex/Em = 650/660 nm
    产品介绍
    细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面, 这些细胞膜表面
    的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞
    膜外,使 PS 暴露在细胞膜外表面。Annexin V具有易于结
    合到磷脂类如 PS 的特性,对 PS 有高度的亲和性。因此,
    该蛋白可作为敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。
    Annexin V-APC可以与7-AAD/PI等联合使用, 来检测细
    胞凋亡情况。7-AAD/PI可被排除在活细胞和早期凋亡细胞
    之外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞可以同时被Annexin
    V-APC和7-AAD结合染色呈现双阳性,从而来区分活细胞、

    早凋细胞与晚凋细胞。

    使用方法
    1. 根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经处
    理的细胞样品, 作为阴性对照。 此外, 设定一组样品做单染,
    用于调节补偿。
    2. 沉淀细胞。
    悬浮细胞:1000 rpm,离心 5 min 沉淀细胞;
    贴壁细胞:用不含 EDTA 的胰酶消化细胞,1000 rpm,
    离心 5 min 沉淀细胞,胰酶消化时间不宜过长,以防引起
    假阳性。对于特定的细胞,如果细胞无法完全离心至离心管
    底, 可以适当延长离心时间或稍微增大转速。 小心吸除上清,
    可以残留约 50 μL 左右的培养液,以避免吸走细胞。
    注:细胞用胰蛋白酶消化后,使细胞在 培养条件和
    最适培养基中恢复约30 min,然后再染色。因为胰蛋白酶消
    化会暂时破坏质膜,允许Annexin V结合磷脂酰丝氨酸在细
    胞膜的细胞质表面上,从而导致假阳性染色。
    3. 加入约1 mL 4℃预冷的 PBS,重悬细胞,再次离心沉淀
    细胞,小心吸除上清。
    4. 用适当的缓冲液重新悬浮细胞,调节其浓度1-5×10^
    6/mL
    (缓冲液可选择终浓度为 2 mM Hepes/NaOH, pH 7.4,28
    mM NaCl,0.5 mM CaCl2溶液)。
    5. 取100 μL的细胞悬液于5 mL流式管中, 加入5 μL Annexin
    V-APC 混匀后于室温避光孵育5 min。
    6. 加入10 μL 20 μg/mL的 7-AAD 或 PI,并加400 μL PBS,
    立刻进行流式检测。流式细胞仪检测时,Annexin V-APC用
    633 nm激发器激发, 发射波长660 nm,建议使用FL4或
    RL1通道检测。
    注意事项
    1. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注
    意避光,以减缓荧光淬灭。
    2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
    Annexin V-APC偶联物