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      产品分类
    Cy3-E SE (Cy3-E 琥珀酰亚-胺酯)
    物品单位 价格 品牌
    1400 XKBio
    • 产地:上海
    • 型号:1 mg
    • 货号:XK5077
    • 发布日期: 2022-03-28
    • 更新日期: 2022-03-29
    产品详细说明
    产地 上海
    品牌 XKBio
    货号 XK5077
    用途范围 科研
    纯度 100%
    CAS编号
    规格 1 mg
    是否进口

    Cy SE(Cy琥珀酰亚-胺酯) 产品说明书
    Cy SE(Cy琥珀酰亚-胺酯)
    货号 : XK5077

    分子式  分子结构图



    储存条件
    -20℃避光保存,有效期见外包装。
    产品介绍
    Cy SE 是一种近红外荧光标记染料,可溶于有机溶剂如
    DMSO,DMF,被广泛用于标记肽、蛋白质和寡聚体等生物
    分子,特别是精细蛋白和易于变性的蛋白。 Cy系列染料除
    了用于标记生物分子外,也常被用于动物活体成像。由于细
    胞和组织的自发荧光在近红外波段小,而近红外光在生物组
    织中的穿透深度较大,因此在检测复杂生物系统时,Cy 系
    列染料能提供更高的特异性和灵敏度。同时,Cy 系列染料
    还拥有紫外光区染料和同位素标记无法具备的生物安全性,
    有利于在活生物体中监控各种标记分子的分布。
    Cy Dye SE 标记原理
    使用方法
    1. Cy SE标记蛋白(常规方法)
    (1)制备染料储存液
    室温预热一管 1 mg的 Cy SE,在管中加入适量的无水
    DMSO 或 DMF(不含胺),配制浓度为 10 mM 的染料储存
    液。适当条件下,可以涡旋以便充分溶解染料。如果使用更
    微量的蛋白进行标记反应,那么染料需要稀释至更低浓度。
    注:剩余的染料储存液应于-20°C低温存放,以备后续使用。
    如果使用无水 DMSO 配制染料储存液,那么染料至少可以
    保存一个月。
    (2)计算染料用量
    Cy SE 染料用量[mg] = 8 ×标记蛋白质量× Cy SE 染料分子量
    /标记蛋白分子量
    注:8,染料蛋白摩尔比,是一个实验经验值,适用于常规
    的蛋白、多肽标记。
    (3)用 pH 8.3-8.5 的缓冲液重悬待标记蛋白
    推荐使用 pH 8.3 的0.1 M 碳酸氢钠溶液,或者 0.1 M 磷
    酸盐缓冲液,蛋白浓度控制在 1-10 mg/mL时的标记效果较
    好。注意 pH 控制在8.3-8.5 之间。避免使用含有胺的缓冲液
    (有时可以使用 Tris,但不推荐使用)。
    注:当进行大规模标记(几百毫克 SE)时,注意由于SE 的
    水解,混合物随时间趋于酸化。需要监测 pH  值,或使用更
    浓的缓冲液。
    (4)将染料加入蛋白溶液中,并涡旋混匀,冰上过夜或室
    温反应至少 4 h。
    (5)选用适当方法纯化染料-蛋白共轭物
    凝胶过滤是普遍使用的一种大分子物质纯化的方法,另
    外,也可以选择沉淀或色谱法分离提纯,针对蛋白或核酸的
    纯化,也可选择乙醇或丙酮沉淀的方法。
    (6)计算染料-蛋白共轭物浓度
    染料-蛋白共轭物浓度的确定可通过以下公式计算:
    C(mg/mL) = {[A280 -(Amax× Cf)]/ ε} ×  稀释因子
    a.C 是指染料-蛋白共轭物浓度;
    b.  稀释因子是指在光度测量时的稀释倍数;
    c. A280和 Amax分别是指在 280 nm处的吸光度以及在吸收波
    长处的吸光度;
    d. Cf是校正因子;
    e. ε 则是指蛋白的消光系数。
    注:过柱洗脱的蛋白溶液直接用于吸光度检测可能浓度过大,
    因此需要稀释至约 0.1 mg/mL。稀释倍数需要从起初抗体量
    以及蛋白液洗脱的总体积来进行预估。
    (7)结合比例(DOL)计算
    DOL通过下式计算:
    DOL = (Amax× Mwt ×  稀释因子)/(ε × C)
    a. Amax,稀释因子,C 值在(6)中已经明确;
    b. Mwt 是指蛋白的分子量;
    c. ε 是 Cy SE 的消光系数;
    DOL值会上下波动,但也能得到很好的实验效果。
    2. 活体成像领域
    (1)实验动物准备
    根据实验需求准备需要活体成像的动物,动物分组、阴
    性对照、阳性对照根据具体实验设置。
    (2)成像
    通过尾静脉注射、皮下-注射、原位移植等方法接种
    Cy Dye SE或Cy Dye SE标记的生物分子或药物于动物体内。
    根据实验要求选择成像时间,对实验动物全身或局部部位进
    行荧光扫描,记录动物体内发射荧光的成像图片,分析荧光
    复合物(探针、药物)的分布情况。成像结束后,根据实验
    需要,选择是否需要解剖内脏进行成像分析。
    注:a. 实验动物于成像前 6 h 开始禁食,以降低因胃肠道食
    物引起的背景干扰。
    b. 用量和时间需要客户根据自己的仪器和药物试
    剂等条件优化。
    注意事项
    1.  溶解后的 Cy SE 溶液 立即使用。
    2.  荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光
    淬灭。
    3.  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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    Cy SE(Cy琥珀酰亚-胺酯)