上海晅科生物科技有限公司
    咨询热线
    021-62457717
      产品分类
    LS405 SE(LS405琥珀酰亚-胺酯)
    物品单位 价格 品牌
    2400 XKBio
    • 产地:上海
    • 型号:1 mg
    • 货号:XK0034
    • 发布日期: 2022-03-28
    • 更新日期: 2022-03-28
    产品详细说明
    产地 上海
    品牌 XKBio
    货号 XK0034
    用途范围 科研
    纯度 100%
    CAS编号
    规格 1 mg
    是否进口

    Dye Succinimidyl Ester(SE)(琥珀酰亚胺酯) 产 品说明书 
    Dye Succinimidyl Ester(SE)(琥珀酰亚胺酯) 
    产品规格:1 mg 
    产品货号: XK0034
    货号  名称 
    Absmax/E

    A280/Amax 
    or Cf 
    (protein) 
    Extinction 
    coefficient(ε) 
    Optimal 
    DOL(IgG) 
    MW 
    LS0034  LS405 SE(LS405 琥珀酰亚胺酯)  408/452  0.13  41,000  4-6  701 
     储存条件 
    -20℃避光保存,有效期见外包装。 
     产品介绍 
     SE (or NHS ester)是我司生产的具有氨基反应活性
    的一类荧光染料。该类染料的SE基团可以与氨基基团反应
    生产稳定的酰胺键。相比于市面上其他同类染料,LS®是稳
    定性更强、水溶性更好、荧光强度更优的新一代荧光染料。 

     
     使用方法(以标记 IgG抗体为例) 
    1. 实验材料 
    (1)IgG:IgG不可含有能与染料反应的胺类化学物质,如
    氨基酸、Tris、BSA、明胶等。如果 IgG 中含有此类化学物
    质,应用 pH~7.4的PBS 缓冲液预先透析处理。叠氮类化 
    合物的存在不会影响标记反应。 
    (2)无水 DMSO 
    (3)NaHCO3 
    (4)葡聚糖凝胶 G-25 透析柱 
    (5)PBS 缓冲液(pH~7.4) 
    (6)NaN3 
    (7)BSA 
     2. 标记方法和步骤 
    (1)准备标记抗体 
    用 0.1 M 的 NaHCO3溶液
    (pH~8.3)稀释抗体,使抗体终浓度为 2.5 mg/mL。如果产
    品预先用磷酸盐缓冲液稀释,如 PBS 缓冲液(不含胺基类
    化合物),那么可以直接在该缓冲液中加入约 1/10 体积1M
    的 NaHCO3母液,使 NaHCO3终浓度为 0.1 M。 
    注:蛋白浓度为 2.5 mg/mL时,标记效率大概为 35%,蛋白
    浓度低于 2.5 mg/mL也可用于标记,但标记效率会降低。当
    蛋白浓度高于 5 mg/mL时,标记效率可能更高。由于缓冲 
    液和蛋白纯度存在差异性,因而更 的标记效率由实操 
    条件决定。如果蛋白浓度过低,可以通过超滤法进行浓缩。  
    (2)准备染料储存液 
    室温预热一管 1 μmole 的 LS® SE,在管中加入 0.1 mL
    的无水 DMSO,充分涡旋溶解染料,配制浓度为 10 mM 的
    染料储存液。如果使用更微量的蛋白进行标记反应,那么染
    料需要稀释至更低浓度。 
    注:a.  剩余的染料储存液应于-20℃低温存放,以备后续使
    用。如果使用无水 DMSO 配制染料储存液,那么染料至少
    可以保存一个月。 
    b.  染料也可以用去离子水配制,但是由于染料在水中
    会缓慢水解,所以水配制的储液 现配现用。 
    (3)标记反应步骤 
    a.  搅拌或涡旋混匀蛋白溶液,逐步滴加 15-25 μL的染料储
    存液(10 mM),使染料/蛋白的摩尔比在 9: 1 至15: 1 的范
    围内。LS® SE 标记 IgG抗体的 DOL(结合于每个蛋白分子
    上的染料数量)范围请参考上表。 
    b.  在室温下搅拌反应 
    1 h,微量标记时也可在摇床上振荡孵育 1 h。 
    注:在进行结合反应的同时,进行步骤 2(4),平衡葡聚糖凝
    胶 G-25 透析柱。 
    (4)从反应液中分离标记蛋白 
    a.  用PBS 缓冲液(pH~7.4)平衡葡聚糖凝胶 G-25 透析柱(10 
    mm×300 mm)。 
    b.  将步骤3(b)反应溶液加入柱子,并用 1×PBS 缓冲液洗脱。
    首先洗脱出来的着色带是染料-蛋白结合物。 
    注:a.  对于小规模的标记反应,为了避免过度稀释产物,
    可以使用超滤装置去除结合物中的自由染料。 
    b.  当结合反应完成后,如不及时分离染料-蛋白结合物,
    可以加入 50 μL 1M 赖氨酸终止反应。多数情况下,不需要
    此操作,因为剩余的未反应的染料在反应 已经被充分水
    解。 
    3. 确定 DOL 
    (1)蛋白浓度的确定 
    抗体浓度可通过以下公式计算: 
    C(mg/mL)={[A280 -(Amax 
    ×  Cf)]/1.4} ×   稀释因子; 
    a. C 是指实验收集的抗体浓度; 
    b.  稀释因子是指在光度测量时的稀释倍数; 
    c. A280和 Amax分别是指在 280 nm处的吸光度以及在吸收波
    长处的吸光度; 
    d. Cf是校正因子,LS® 
    SE 染料的 Cf值请参考上面表格; 
    e. 1.4 则是指 IgG的消光系数; 
    注:过柱洗脱的蛋白溶液直接用于吸光度检测可能浓度过
    大,因此需要稀释到大约 0.1 mg/mL。稀释倍数(即稀释因
    子)需要从起初抗体数量(比如 5 mg)以及蛋白液洗脱的
    总体积来进行预估。 
    (2)DOL的估算 
    DOL通过下式计算: 
    DOL = (Amax 
    ×  Mwt ×   稀释因子)/(ε ×  C) 
    a. Amax,稀释因子,C 值在 3(1)中已经明确; 
    b. Mwt 是指 IgG的分子量(150,000); 
    c. ε 是 LS® SE 的摩尔吸光系数,参考 页表格; 
    d.  标记 LS® SE 的 IgG抗体最适 DOL值,请参考 页表
    格,DOL值会波动,但也能得到很好的实验效果。 
     注意事项 
    1.  标记的蛋白如需长期储存,推荐加入 5-10 mg/mL BSA和
    0.01-0.03% NaN3,以防止蛋白变性和微生物滋生。放置于
    4℃避光保存。若加入了终浓度为 50%的甘油,可放-20℃保
    存。可稳定保存一年以上。 
    2.  操作过程注意避光,搅拌速度应适当以避免产生气泡。 
    3.  层析柱装柱时,尽量使柱体均匀,柱面平整,无气泡、
    裂隙。 
    4.  上样时注意,当柱顶缓冲液与凝胶平面相切时再加样品,
    洗脱时,当样品走至与凝胶平面相切时再加洗脱液。 
    5.  影响标记效率的其他因素还包括:温度、反应时间、pH、
    荧光染料与蛋白的量等,需注意控制。 
    6.  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套。
    本产品仅用于科研

    Dye Succinimidyl Ester(SE)(琥珀酰亚胺酯)