594-3-dUTP（594-3标记dUTP）产品说明书
594-3-dUTP（594-3标记dUTP）
产品货号：XK0044
产品规格：25 nmole
储存条件
-20℃避光保存，有效期见外包装。可以采用 pH7.4 的 10 mM
Tris 溶解后，分装保存，避免反复冻融。

使用方法
DNA 标记
1. 试剂（自备）
（1）Taq DNA聚合酶
（2）10× Taq reaction buffer
（3）25 mM MgCl2
（4）dATP, dTTP, dCTP, dGTP (单独溶液), 1 mM each
（5）DNA模板
（6）正向、反向引物，10 μM each
（7）PCR 清洁试剂盒
2. PCR反应
（1）先按照表 1 反应体系配制PCR 反应混合液
（2）再在每个反应管加 1μL 1mM YF® dye dUTP 染料
注：阴性对照管，加 1 μL 1mM dTTP 代替 YF® dye dUTP
（3）按照表 2 程序运行PCR反应
注：a.  热变性时间依据不同的Taq 酶进行调整；
b.  退火温度设置：Tm - 5℃；
c.  延伸时间根据扩增片段大小而定，一般 200 - 300 bp
片段设为 1 min 即可。
（4） 可选步骤。用PCR 清洁试剂盒去除未掺入的单核苷酸。
表 1 PCR 反应体系
组分  体积  终浓度
10× Taq reaction buffer  2 μL  1×
25 mM MgCl2  2 μL  5 mM
1 mM dATP  2 μL  100 μM
1 mM dCTP  2 μL  100 μM
1 mM dGTP  2 μL  100 μM
1 mM dTTP  1 μL  50 μM
10 μM  正向引物  1 μL  500 nM
10 μM  反向引物  1 μL  500 nM
模板  1 ng  50 pg/uL
Taq  1 U  0.05 U/μL
dH2O  up to 19 μL
表 2 PCR 反应条件
94℃ 2 min  Hold
94℃ 30 sec
30 个循环  50 - 60℃ 30 sec
72℃ 1 min
72℃ 5 min  Hold
（5）取 10%的PCR 产物进行琼脂糖凝胶电泳（凝胶不加入
DNA染料），检测 PCR 反应的效率和特异性，通过紫外凝
胶成像仪或激光凝胶扫描仪观察。其中远红外染料（波长
≥650 nm），肉眼无法观察。
注：凝胶染色前先观察 YF®染料的荧光，以免与下一步的凝
胶染料发生荧光淬灭。
(6)  采用后染法，使用 DNA 凝胶染料对凝胶进行染色，观
察总的PCR 产物或阴性对照组的PCR 扩增产物。
TUNEL 法检测细胞凋亡
注：我司提供了一系列 YF®
Dye TUNEL Assay Kits，试剂盒
组分包括：平衡缓冲液、反应缓冲液和 TdT酶等。
1. 试剂（自备）
（1）PBS, pH 7.4
（2）4%甲醛  in PBS
（3）70%乙醇（可选）
（4）0.2% Triton™ X - 100 in PBS
（5）0.1% Triton™ X  - 100 in PBS/5 mg/mL bovine serum
albumin (BSA)
（6）12.5 U/μL末端脱氧核糖核苷酸转移酶  (TdT)
（7）5×TdT反应缓冲液：1M 二甲基胂酸钾，125 mM Tris-
HCl，1.25 mg/mL BSA，pH 6.6
（8）25 mM CoCl2  溶液
（9）100 μM dATP
2. 样品准备
（1）细胞或新鲜冷冻组织切片的准备
a.  准备一份不含 TdT酶的样品作为阴性对照。（可选步骤）
b.  用PBS 清洗细胞或者组织切片两次。
c.  向上述细胞或组织切片中加入4%甲醛， 4℃孵育30 min。
d. 用 70%乙醇重悬细胞，-20℃可储存两周。（可选步骤）
e.  用PBS 清洗两次。
f.  促渗加入适量的 0.2% Triton X - 100的PBS 溶液，室温孵
育 30 min。
g.  用PBS 清洗两次。
（2）石蜡组织切片的准备
a.  准备一份不含 TdT酶的样品做阴性对照（可选）。
b.  根据标准步骤进行脱蜡或水化处理。
c.  用PBS 清洗两次。
d.  用20 μg/mL蛋白酶 K（in PBS）促渗，处理组织，37℃
孵育 30 min。根据组织类型，蛋白酶 K 的孵育温度和时间
可相应的变化。
e.  用PBS 清洗两次。
3. 反应混合液准备
（1）用去离子水将 YF® dye dUTP 稀释成 10 μM。
（2） 每个样品准备 100 μL TUNEL 平衡缓冲液，配比如下：
20 μL 5×TdT反应缓冲液；
20 μL 25 mM CoCl2；
60 μL dH2O。
(3)  每个样品准备50 μL TUNEL反应混合液，如下表所示：
组分  体积  最终浓度
5×TdT reaction buffer  10 μL  1×
25 mM CoCl2  10 μL  5 mM
100 μM dATP  2.5 μL  5 μM
10 μM YF® dye dUTP  2.5 μL  0.5 μM
12.5 U/μL TdT  1 μL  12.5 U/reaction
dH2O  24 μL
总体积  50 μL
4. TUNEL 染色
（1） 向样品中加入 100 μL平衡缓冲液，室温下孵育 5 min。
注：对于贴壁细胞或者组织切片，用石蜡盖玻片覆盖样品，
使缓冲液均匀覆盖样品。
（2）去除平衡缓冲液，另外加入 50 μL反应缓冲液。
注：对于贴壁细胞或者组织切片，用盖玻片覆盖样品，使缓
冲液均匀覆盖组织。
（3） 37℃避光孵育 60 min。组织切片需 37℃避光孵育 2 h。
注：a.  对于细胞或组织切片，孵育需在潮湿环境下进行；
b.  对于悬浮细胞，孵育需在摇床上进行，或者在孵育的
过程中，每隔 15 min，轻轻的摇晃一下反应液。
（4）用含有 0.1% Triton X - 100，5 mg/mL BSA的 PBS 溶
液清洗样品三次，每次 5 min。
（5）如果需要，可进行样品复染。采用荧光显微镜或者流
式细胞仪观察。TUNEL 标记的细胞的细胞核显示出明亮的

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本产品仅用于科研

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