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594-3-dUTP(594-3标记dUTP)
  • 品牌:XKBio
  • 产地:上海
  • 型号:25 nmole
  • 货号:XK0044
  • 价格: ¥3160/支
  • 发布日期: 2022-03-28
  • 更新日期: 2024-07-12
产品详请
产地 上海
品牌 XKBio
货号 XK0044
用途 科研
纯度 100%
CAS编号
规格 25 nmole
是否进口

594-3-dUTP(594-3标记dUTP)产品说明书
594-3-dUTP(594-3标记dUTP)
产品货号:XK0044
产品规格:25 nmole
储存条件
-20℃避光保存,有效期见外包装。可以采用 pH7.4 的 10 mM
Tris 溶解后,分装保存,避免反复冻融。

使用方法
DNA 标记
1. 试剂(自备)
(1)Taq DNA聚合酶
(2)10× Taq reaction buffer
(3)25 mM MgCl2
(4)dATP, dTTP, dCTP, dGTP (单独溶液), 1 mM each
(5)DNA模板
(6)正向、反向引物,10 μM each
(7)PCR 清洁试剂盒
2. PCR反应
(1)先按照表 1 反应体系配制PCR 反应混合液
(2)再在每个反应管加 1μL 1mM YF® dye dUTP 染料
注:阴性对照管,加 1 μL 1mM dTTP 代替 YF® dye dUTP
(3)按照表 2 程序运行PCR反应
注:a.  热变性时间依据不同的Taq 酶进行调整;
b.  退火温度设置:Tm - 5℃;
c.  延伸时间根据扩增片段大小而定,一般 200 - 300 bp
片段设为 1 min 即可。
(4) 可选步骤。用PCR 清洁试剂盒去除未掺入的单核苷酸。
表 1 PCR 反应体系
组分  体积  终浓度
10× Taq reaction buffer  2 μL  1×
25 mM MgCl2  2 μL  5 mM
1 mM dATP  2 μL  100 μM
1 mM dCTP  2 μL  100 μM
1 mM dGTP  2 μL  100 μM
1 mM dTTP  1 μL  50 μM
10 μM  正向引物  1 μL  500 nM
10 μM  反向引物  1 μL  500 nM
模板  1 ng  50 pg/uL
Taq  1 U  0.05 U/μL
dH2O  up to 19 μL
表 2 PCR 反应条件
94℃ 2 min  Hold
94℃ 30 sec
30 个循环  50 - 60℃ 30 sec
72℃ 1 min
72℃ 5 min  Hold
(5)取 10%的PCR 产物进行琼脂糖凝胶电泳(凝胶不加入
DNA染料),检测 PCR 反应的效率和特异性,通过紫外凝
胶成像仪或激光凝胶扫描仪观察。其中远红外染料(波长
≥650 nm),肉眼无法观察。
注:凝胶染色前先观察 YF®染料的荧光,以免与下一步的凝
胶染料发生荧光淬灭。
(6)  采用后染法,使用 DNA 凝胶染料对凝胶进行染色,观
察总的PCR 产物或阴性对照组的PCR 扩增产物。
TUNEL 法检测细胞凋亡
注:我司提供了一系列 YF®
Dye TUNEL Assay Kits,试剂盒
组分包括:平衡缓冲液、反应缓冲液和 TdT酶等。
1. 试剂(自备)
(1)PBS, pH 7.4
(2)4%甲醛  in PBS
(3)70%乙醇(可选)
(4)0.2% Triton™ X - 100 in PBS
(5)0.1% Triton™ X  - 100 in PBS/5 mg/mL bovine serum
albumin (BSA)
(6)12.5 U/μL末端脱氧核糖核苷酸转移酶  (TdT)
(7)5×TdT反应缓冲液:1M 二甲基胂酸钾,125 mM Tris-
HCl,1.25 mg/mL BSA,pH 6.6
(8)25 mM CoCl2  溶液
(9)100 μM dATP
2. 样品准备
(1)细胞或新鲜冷冻组织切片的准备
a.  准备一份不含 TdT酶的样品作为阴性对照。(可选步骤)
b.  用PBS 清洗细胞或者组织切片两次。
c.  向上述细胞或组织切片中加入4%甲醛, 4℃孵育30 min。
d. 用 70%乙醇重悬细胞,-20℃可储存两周。(可选步骤)
e.  用PBS 清洗两次。
f.  促渗加入适量的 0.2% Triton X - 100的PBS 溶液,室温孵
育 30 min。
g.  用PBS 清洗两次。
(2)石蜡组织切片的准备
a.  准备一份不含 TdT酶的样品做阴性对照(可选)。
b.  根据标准步骤进行脱蜡或水化处理。
c.  用PBS 清洗两次。
d.  用20 μg/mL蛋白酶 K(in PBS)促渗,处理组织,37℃
孵育 30 min。根据组织类型,蛋白酶 K 的孵育温度和时间
可相应的变化。
e.  用PBS 清洗两次。
3. 反应混合液准备
(1)用去离子水将 YF® dye dUTP 稀释成 10 μM。
(2) 每个样品准备 100 μL TUNEL 平衡缓冲液,配比如下:
20 μL 5×TdT反应缓冲液;
20 μL 25 mM CoCl2;
60 μL dH2O。
(3)  每个样品准备50 μL TUNEL反应混合液,如下表所示:
组分  体积  最终浓度
5×TdT reaction buffer  10 μL  1×
25 mM CoCl2  10 μL  5 mM
100 μM dATP  2.5 μL  5 μM
10 μM YF® dye dUTP  2.5 μL  0.5 μM
12.5 U/μL TdT  1 μL  12.5 U/reaction
dH2O  24 μL
总体积  50 μL
4. TUNEL 染色
(1) 向样品中加入 100 μL平衡缓冲液,室温下孵育 5 min。
注:对于贴壁细胞或者组织切片,用石蜡盖玻片覆盖样品,
使缓冲液均匀覆盖样品。
(2)去除平衡缓冲液,另外加入 50 μL反应缓冲液。
注:对于贴壁细胞或者组织切片,用盖玻片覆盖样品,使缓
冲液均匀覆盖组织。
(3) 37℃避光孵育 60 min。组织切片需 37℃避光孵育 2 h。
注:a.  对于细胞或组织切片,孵育需在潮湿环境下进行;
b.  对于悬浮细胞,孵育需在摇床上进行,或者在孵育的
过程中,每隔 15 min,轻轻的摇晃一下反应液。
(4)用含有 0.1% Triton X - 100,5 mg/mL BSA的 PBS 溶
液清洗样品三次,每次 5 min。
(5)如果需要,可进行样品复染。采用荧光显微镜或者流
式细胞仪观察。TUNEL 标记的细胞的细胞核显示出明亮的

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