上海晅科生物科技有限公司
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      产品分类
    532 Tyramide(YF?532酪胺),200×
    物品单位 价格 品牌
    438 XKBio
    • 产地:上海
    • 型号:10 μL
    • 货号:XK0076S
    • 发布日期: 2022-03-26
    • 更新日期: 2022-03-29
    产品详细说明
    产地 上海
    品牌 XKBio
    货号 XK0076S
    用途范围 科研
    纯度 100%
    CAS编号
    规格 10 μL
    是否进口

    Biotin Tyramide(YF®/Biotin 酪胺) 产品说明书
    Biotin Tyramide(YF®/Biotin 酪胺)
    产品规格:10 μL,100 μL
    产品货号:XK0076S
    产品参数
    350 Tyramide:347/448 nm
    488 Tyramide:490/515 nm
    532 Tyramide:527/558 nm
    555 Tyramide:555/565 nm
    594 Tyramide:590/617 nm
    640 Tyramide:642/662 nm
    680 Tyramide:681/698 nm
    储存条件
    -20℃避光保存,有效期见外包装。
    产品介绍
    酪胺信号放大技术(Tyramide Signal Amplification)又
    称催化信号放大技术(Catalyzed Signal Amplification),是
    一类利用HRP对靶抗原进行高密度原位标记的酶学检测方
    法,其不但可以用于IF/IHC的信号放大,亦可用于Elisa、 ISH
    等检测。
    酪胺信号放大技术可以用于检测用传统方法无法检出
    的低丰度靶标。基于酪胺的信号放大技术能够提供极强的灵
    敏度、检测极微量的目的抗原。酪胺信号放大技术极大的降
    低抗体的用量,节约抗体。酪胺信号放大试剂盒可与传统染
    色方法结合使用以多色成像,也可以顺序进行两个或更多个
    酪胺反应以标记一个样品上的不同靶标。


    使用方法
    1. 自备试剂:
    (1)1×  PBS
    (2)多聚甲醛固定剂(4%多聚甲醛  in PBS)
    (3)促渗试剂  (0.5% Triton X - 100 in PBS)
    (4)0.1 M柠檬酸钠缓冲液  (pH 6.0)
    (5)一抗,二抗
    (6)Tyramide Amplification Buffer(含过氧化氢)
    (7)30%过氧化氢
    (8)封闭缓冲液:可将1 g BSA溶于100 mL含0.5% Triton X
    - 100的PBS中配置成封闭缓冲液,也可选择市面上在售封闭
    缓冲液。
    2. 下列组分仅用于Biotin-Tyramide试剂盒中:
    (1)生物素封闭清洗缓冲液:含1% BSA和0.05% Tween 20
    的PBS。
    (2)未标记的链霉亲和素溶液:含0.1 mg/mL链霉亲和素的
    生物素封闭清洗缓冲液。
    (3)生物素溶液:含 0.5 mg/mL生物素的生物素封闭清洗
    缓冲液。
    以下参考步骤,可用于细胞或组织切片的酪酰胺染色,
    每个样品使用100 μL染色液 (足以覆盖96孔板的一个孔或约
    1  cm2的组织部分)。可根据不同的样本尺寸增大或缩小体
    积。
    3. 样本准备
    (1)细胞样品
    a.  可选:准备一份阴性对照样本(不孵育一抗的样本)。
    b. 1× PBS 清洗细胞两次。
    c.  细胞固定:加入适量 4%  多聚甲醛(pH 7.4)溶液,4 ℃
    放置 15 min。
    d. 1× PBS 清洗细胞两次。
    e.  通透细胞:用配制于PBS 中的 0.5% Triton X - 100 溶液通
    透,室温放置 10 min。或者加入冰上预冷的 70%乙醇,在
    -20℃孵育 4 h。细胞能在 70%乙醇中-20℃的条件下保存一
    周。
    f. 1× PBS 清洗细胞两次。
    (2)石蜡组织切片
    a.  将石蜡切片放置在 60℃的烘箱中 30 min。
    b.  室温下用二甲苯浸泡石蜡组织切片 2 次,每次5 min,以
    脱掉石蜡。
    注:二甲苯有毒,易挥发,请在通风橱中进行此操作。
    c.  室温下,将切片样本浸没于无水乙醇中漂洗 2 次,每次5
    min。
    d.  室温下,将切片样本连续浸没在不同浓度梯度的乙醇
    (95%、90%、80%、70%)中,每种浓度各漂洗 1 次,每
    次 5 min。
    e.  室温下,将切片浸没于纯水中漂洗 1 次,每次3 min,再
    将切片浸没于 1×   PBS 中漂洗1 次,每次 3 min,用滤纸小
    心吸干切片样本周围多余液体。
    f.  用免疫组化笔在切片样本周围描绘样品轮廓,以便下游通
    透与标记。
    g.  抗原修复:将 0.1 M 柠檬酸盐缓冲液(PH = 6.0),用微
    波炉加热至沸腾,将脱完蜡及复水好的片子置于缓冲液中
    间,断煮沸 10 min。注意此过程中,玻片上组织要一直浸没
    于缓冲液中,以保证组织的抗原修复效果。抗原修复持续时
    间过后,取出放于室温中让其慢慢地降温。
    注:需根据不同的样本选择不同的抗原修复方法。
    h. 1× PBS 清洗两次。
    4.(可选)内源性过氧化物酶灭活
    如果需要, 可加入足够量的 3% Hydrogen Peroxide 覆盖
    样品并在室温下孵育 60 min, 淬灭样品的内源性过氧化物酶
    活性。
    5.(可选)内源性生物素阻断
    进行链霉亲和素/生物素检测时,我们建议阻断样品中
    的内源性生物素以减少背景。对于标记 YF®染料的酪酰胺和
    HRP 二抗的试剂盒来说,可省略此步骤。
    (1)在室温下,将样品与未标记的链霉亲和素溶液一起孵
    育 15 min,然后使用生物素封闭清洗缓冲液将样品在室温下
    洗涤 3 次,每次5 min。
    (2)在室温下将样品与生物素溶液孵育 30 min,以封闭链
    霉亲和素上多余的生物素结合位点。之后用生物素封闭清洗
    缓冲液洗涤样品 3 次,每次5 min。
    6. 免疫标记
    (1)封闭:用封闭缓冲液室温封闭 1 h。市面在售封闭缓冲
    液一般封闭 10 min 即可。
    (2)用封闭缓冲液将一抗稀释至适当的浓度。将样品与一
    抗在室温下孵育 1 h 或 4℃过夜。
    注:如果使用含有 HRP  –  Streptavidin 的试剂盒,请使用生
    物素偶联的一抗。
    (3)室温下 1×PBS 洗涤3 次,每次 5 min。
    (4)在封闭缓冲液中将 HRP - conjugated 以1 : 200 稀释。
    用该溶液在室温下孵育上述样品 1 h。
    (5)室温下 1×PBS 洗涤3 次,每次 5 min。
    (6)用 1×Tyramide Amplification Buffer 以 1  :  200 稀释
    Tyramide Stock Solution,200×  来制备染色液。每个样品准
    备 100 μL染色液。染色液在室温下避光保存,最长可保存
    24 h。
    (7)将样品与染色液在室温下孵育 10 min。
    (8)在室温下用 1×  PBS 洗涤3 次,每次 5 min。
    (9)可选:如果使用 Biotin-酪酰胺试剂盒,可使用荧光标
    记的链霉亲和素进行荧光显色,也可使用含 HRP 的链霉亲
    和素标记,后使用 DAB 显色。
    (10)显微镜成像。对于载玻片上的组织样本,请盖上盖玻
    片并密封后,再显微镜成像。
    注意事项
    1. 与荧光二抗相比,TSA 试剂盒显示出更高的灵敏度和更
    强的信号。因此,实验时一抗的使用浓度较低,这样可以降
    低非特异性结合带来的背景荧光,我们建议梯度设置一抗浓
    度以找到 浓度。
    2. 如果需要考虑背景荧光,建议设置未与一抗孵育的阴性对
    照。确保该阴性对照在孵育和洗涤过程中没有被阳性样品中
    的试剂交叉污染。对于组织样品,我们还建议对未染色的对
    照(不添加抗体或酪酰胺)进行成像,以确定组织自发荧光
    对背景的影响。
    3. 建议使用 5  μg/mL的 HRP 结合物,降低浓度可能会影响
    信号强度和灵敏度。
    4. 建议 1 : 200 稀释 YF®/Biotin - Tyramide。较高的浓度可能
    会导致信号过强或背景高,可以从 1 : 100 到1 : 1000 摸索以
    找到 浓度。
    5. 可以在每个酪酰胺反应后通过进行 HRP 淬灭或抗体剥
    离,依次使用多个酪酰胺扩增试剂盒来标记同一样品上的不
    同靶标。
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    本产品仅用于科研

    Biotin Tyramide(YF®/Biotin 酪胺)