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555 酪胺信号放大试剂盒,HRP-羊抗兔IgG
  • 品牌:XKBio
  • 产地:上海
  • 型号:50 slides
  • 货号:XK6088S
  • 价格: ¥1490/支
  • 发布日期: 2022-03-26
  • 更新日期: 2024-07-12
产品详请
产地 上海
品牌 XKBio
货号 XK6088S
用途 科研
纯度 100%
CAS编号
规格 50 slides
是否进口

350/488/555/594/640/生物素酪胺信号放大试剂盒 产品说明书
350/488/555/594/640/生物素酪胺信号放大试剂盒
产品规格:50 slides, 200 slides
产品货号:XK6088S
产品内容:
表 1: 组分名称、编号及体积
组分编号 组分名称 组分体积
50 slides 200 slides
见表 2 Tyramide Stock Solution, 200× 25 μL 100 μL
见表 2 HRP-conjugated 25 μL 100 μL
60011 BSA 0.5 g 2 g
60012 1× Tyramide Amplification Buffer 5 mL 20 mL
表 2: 试剂盒组分编号
标记染料 Ex/Em
HRP-conjugated YF®/Biotin
Tyramide Goat anti-mouse IgG Goat anti-rabbit IgG Streptavidin
350 347/448 60008 60009 60010 60001
488 490/515 60008 60009 60010 60002
555 555/565 60008 60009 60010 60003
594 590/617 60008 60009 60010 60004
640 642/662 60008 60009 60010 60005
Biotin(生物素) ~ 60008 60009 60010 60007
储存条件
-20℃避光保存,有效期见外包装。
产品介绍
酪胺信号放大技术(Tyramide Signal Amplification)又
称催化信号放大技术(Catalyzed Signal Amplification),是
一类利用HRP对靶抗原进行高密度原位标记的酶学检测方
法, 其不但可以用于IF/IHC的信号放大, 亦可用于Elisa、 ISH
等检测。
酪胺信号放大技术可以用于检测用传统方法无法检出
的低丰度靶标。 基于酪胺的信号放大技术能够提供极强的灵
敏度、检测极微量的目的抗原。酪胺信号放大技术极大的降
低抗体的用量,节约抗体。酪胺信号放大试剂盒可与传统染
色方法结合使用以多色成像, 也可以顺序进行两个或更多个
酪胺反应以标记一个样品上的不同靶标。


使用方法
自备试剂:
? 1× PBS
? 4%多聚甲醛(in PBS)
? 促渗试剂(0.5% Triton X-100 in PBS)
? 0.1 M柠檬酸钠缓冲液(pH 6.0)
? 30%过氧化氢
? 封闭缓冲液:1 g BSA溶于100 mL含0.5% Triton X-100
的PBS中,或选择市面上在售封闭缓冲液。
下列组分仅用于 Biotin-Tyramide 试剂盒中:
? 生物素封闭清洗缓冲液:含1% BSA和0.05% Tween 20
的PBS
? 未标记的链霉亲和素溶液:含0.1 mg/mL链霉亲和素的
生物素封闭清洗缓冲液
? 生物素溶液:含0.5 mg/mL生物素的生物素封闭清洗缓
冲液
? 以下步骤,每个样品使用100 μL染色液(足以覆盖96
孔板的一个孔或约1 cm2
的组织部分)。可以根据不同
的样本尺寸增加或减少染色液用量。
1. 样本准备
(1)细胞样品
a. 可选:准备一份阴性对照样本(不孵育一抗的样本)。
b. 1× PBS清洗细胞两次。
c. 细胞固定:加入适量 4%多聚甲醛(pH 7.4)溶液,4℃放
置 15 min。
d. 1× PBS清洗细胞两次。
e. 通透细胞:加入促渗试剂,室温放置10 min。
f. 1× PBS清洗细胞两次。
(2)石蜡组织切片
a. 将石蜡切片放置在 60℃的烘箱中 30 min。
b. 室温下用二甲苯浸泡石蜡组织切片 2次, 每次5 min,以
脱掉石蜡。
注:二甲苯有毒,易挥发,请在通风橱中进行此操作。
c. 室温下, 将切片浸没于无水乙醇中漂洗2 次, 每次 5 min。
d. 室温下, 将样本连续浸没在不同浓度的乙醇 (95%、 90%、
80%、70%)中,每种浓度漂洗1 次,每次5 min。
e. 室温下,将切片浸没于纯水中 3 min,再将切片浸没于 1×
PBS中 3 min,用滤纸吸干多余液体。
f. 用免疫组化笔描绘样品轮廓,以便下游通透与标记。
g. 抗原修复:将0.1M 柠檬酸钠缓冲液(PH 6.0),用微波
炉加热至沸腾,将切片置于缓冲液中,间断煮沸 10 min。注
意:此过程中,组织要一直浸没于缓冲液中,以保证组织的
抗原修复效果。抗原修复后,取出切片于室温中逐渐降温。
注:需根据不同的样本选择不同的抗原修复方法。
h. 1× PBS 清洗两次。
2.(可选)内源性过氧化物酶灭活
如需要,可加入足够量的3%过氧化氢覆盖样品并在室
温孵育 60 min,淬灭样品的内源性过氧化物酶活性。
3.(可选)内源性生物素阻断
进行链霉亲和素/生物素检测时,建议阻断样品中的内
源性生物素以减少背景。YF®染料标记的酪酰胺和 HRP 标
记的二抗,可省略此步骤。
(1)室温下,将样品与未标记的链霉亲和素溶液混匀后孵
育 15 min 后,用生物素封闭清洗缓冲液将样品在室温下洗
涤 3次,每次 5 min。
(2)室温下,将样品与生物素溶液混匀后孵育 30 min,以
封闭链霉亲和素上多余的生物素结合位点。 用生物素封闭清
洗缓冲液洗涤样品 3次,每次 5 min。
4. 免疫标记
(1)封闭:用封闭缓冲液室温封闭1 h。
(2)用封闭缓冲液将一抗稀释至适当浓度。将样品与一抗
在室温下孵育 1 h或 4℃过夜。
注:如果使用含有 HRP – Streptavidin 的试剂盒,请使用生
物素偶联的一抗。
(3)室温下 1× PBS洗涤 3次,每次 5 min。
(4)用封闭缓冲液将 HRP-conjugated 以 1:200 稀释,室温
孵育 1 h。
(5)室温下 1× PBS洗涤 3次,每次 5 min。
(6)用 1× Tyramide Amplification Buffer 将 Tyramide Stock
Solution, 200×以 1:200稀释,每个样品加 100 μL,室温孵育
10 min。稀释后的染色液可在室温下避光保存 24 h。
(7)室温下 1× PBS洗涤 3次,每次 5 min。
(8)可选:如果使用 Biotin-酪酰胺试剂盒,可使用荧光标
记的链霉亲和素进行荧光显色,也可使用含 HRP 的链霉亲
和素标记,后使用 DAB 显色。
(9)显微镜成像。对于载玻片上的组织样本,请盖上盖玻
片并密封后成像。
5. 多色标记
细胞样本:可在“免疫标记”步骤(8)后使用不同于
步骤(2)中种属来源的一抗以及与 种荧光酪胺光谱兼
容的荧光标签重复免疫标记步骤(1)~(8)。
组织样本:经再次抗原修复(方法同石蜡组织切片抗原
修复步骤)和 1×PBS 清洗两次后,可在“免疫标记”步骤
(8)后使用另一靶标的一抗(与前一靶标相同或不同种属
来源均可)以及与 种荧光酪胺光谱兼容的荧光标签,重
复免疫标记步骤(1)~(8)。
注意事项
1. 1×Tyramide Amplification Buffer 使用后,建议小量分
装,-20℃保存,避免反复冻融。
2. 与荧光二抗相比,Tyramide 试剂盒显示出更高的灵敏度
和更强的信号,因此,实验时一抗的使用浓度较低,建议梯
度设置一抗浓度以找到 浓度。
3. 建议设置未孵育一抗的阴性对照,确保阴性对照在孵育
和洗涤过程中没有被阳性样品中的试剂交叉污染。 对于组织
样品,建议对未染色的对照(不添加抗体或酪酰胺)进行成
像,确定组织是否有自发荧光,排除对背景的影响。
4. 建议使用 5 μg/mL 的HRP 结合物,低浓度可能会影响
信号强度和灵敏度。
5. 建议 1:200稀释 YF®/Biotin-Tyramide。 较高的浓度可能会
导致信号过强或背景高,建议从 1:100到 1:1000梯度稀释。
6. 可依次使用多个 YF®/Biotin-Tyramide 来标记同一样品的
不同靶标, 每次酪酰胺反应后需进行 HRP 淬灭或抗体剥离。

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本产品仅用于科研

350/488/555/594/640/生物素酪胺信号放大试剂盒

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