上海晅科生物科技有限公司
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      产品分类
    总N-O检测试剂盒(Total Nitric Oxide Assay Kit)
    物品单位 价格 品牌
    499 XKBio
    • 产地:上海
    • 型号:50T
    • 货号:XK6027S
    • 发布日期: 2022-03-26
    • 更新日期: 2022-03-26
    产品详细说明
    产地 上海
    品牌 XKBio
    货号 XK6027S
    用途范围 科研
    纯度 100%
    CAS编号
    规格 50T
    是否进口

    总 N-O 检测试剂盒(Total Nitric Oxide Assay Kit)产品说明书
    总 N-O 检测试剂盒(Total Nitric Oxide Assay Kit)
    产品货号:XK6027S
    产品规格:50T, 200T(96孔板)
    组分
    规格 T6027S(50T) T6027L(200T)
    A. 样品稀释液 4 mL 16 mL
    B. NADPH 0.5 mg 2 mg
    C. FAD 0.5 mL 2×1 mL
    D. Nitrate Reductase 250 μL 1 mL
    E. LDH Buffer 0.5 mL 2×1 mL
    F. LDH 0.5 mL 2×1 mL
    G. 1 M NaNO2 250 μL 1 mL
    H. Griess Reagent I 2 × 1.25 mL 10 mL
    I. Griess Reagent II 2 × 1.25 mL 10 mL
    储存条件
    -20℃保存,有效期见外包装。NADPH,Nitrate Reductase,
    NaNO2,Griess Reagent I 和 Griess Reagent II 需避光保存。
    NADPH 配制成溶液后须少量分装,并放于-70℃保存。
    产品介绍
    NO 作为重要的气体信号分子,广泛存在于生物体内和
    各个组织中,并且参与许多生物效应和生理病理过程,NO
    带有自由基,这使它的化学性质非常活泼,在体内迅速氧化
    生成亚硝酸盐和硝酸盐混合物。 本试剂盒基于 Griess 反应的
    原理,采用优化的反应条件,通过硝酸还原酶还原硝酸盐为
    亚硝酸盐,从而达到检测总 NO 含量的目的。
    本试剂盒可以检测的样品有细胞裂解液、组织裂解液、
    细胞或组织的培养液、血清、血浆或尿液等中的一氧化氮含
    量。


    使用方法
    1. 样品处理:
    含有高浓度蛋白的样品如血清或者含有高浓度血清的
    细胞培养液,在加入 Griess Reagent I 后可能会产生沉淀。
    如果产生沉淀,则可将样品沸水浴加热 5 min,以变性蛋白,
    然后 12,000 g 离心5 min,取上清用于后续的测定。对于细
    胞或组织样品可以用相应的裂解液进行裂解。 对于尿液样品,
    通常需要用水稀释 10-50倍后检测。不宜使用肝素抗凝的血
    浆,肝素抗凝的血浆会和 Griess Reagent反应产生沉淀。
    2. 稀释标准品:
    如果样品为血清,则可以简单地使用 PBS、生理盐水等
    适当溶液稀释标准品。 其他样品稀释标准品所用的溶液要和
    制备或稀释样品时所用溶液保持一致。 稀释的标准品宜现配
    现用,不宜冻存。
    把 1 M NaNO2稀释成 1 μM、10 μM、20 μM、40 μM、
    80 μM、100 μM 六个浓度。
    (1)取 1 M NaNO2标准品 1 μL,加到 1 mL 的稀释液中,
    得到 1 mM NaNO2溶液。
    (2)取1 mM NaNO2溶液 10 μL,加到 90 μL 的稀释液中,
    得到 100 μM NaNO2溶液。
    (3) 取 100 μM NaNO2溶液 80 μL, 加到 20 μL 的稀释液中,
    得到 80 μM NaNO2溶液。
    (4)取 80 μM NaNO2溶液,加入等体积稀释液中,得到 40
    μM 的 NaNO2溶液。同样方法稀释,得到 10 μM、20 μM
    NaNO2溶液。
    (5)取 20 μM NaNO2溶液 5 μL,加到 95 μL 的样品所用的
    稀释液中,得到 1 μM NaNO2溶液。
    3. 试剂的准备
    (1)加约 1.2 mL 双蒸水或 Milli-Q级纯水至 2 mg NADPH
    中,颠倒混匀溶解后,配制成 2 mM NADPH,放置冰浴上
    使用,余下的 NADPH溶液须立即分装后-70℃冻存。
    (2)FAD 可以适当分装后-20℃或-70℃保存,使用时放置
    在冰浴上使用。
    (3)Nitrate Reductase 和 LDH 应放置在冰浴上使用(注意
    在使用完毕后立即-20℃保存)。Griess Reagent I 和 Griess
    Reagent II在使用前恢复至室温。
    4. 参考右侧表格依次加入标准品、样品和检测试剂并进行
    相应检测。
    5. 根据标准品曲线计算出样品中一氧化氮的浓度。
    注意事项
    1. 如果 Griess Reagent I 取出时含有沉淀,可将其置于 37℃
    水浴锅中,水浴直至沉淀溶解。
    2. 对于含有较高浓度硝酸盐的培养液,在检测一氧化氮前
    必需先换成其他适当培养液例如 DMEM、MEM、F12等,
    或换成 HBSS 或 PBS 等。因为较高浓度的硝酸盐会对本试
    剂盒产生干扰。
    3. 由于检测过程中有还原反应,凡是影响还原反应的氧化
    或还原试剂要注意避免, 例如常用还原剂 DTT 和巯基乙醇。
    4. 反应必须避光进行,每次加入试剂时,需避免各检测孔
    中产生气泡,以免气泡干扰检测结果。
    5. 样品的用量上限为 60 μL,血清、血浆或组织匀浆液通常
    使用 40 μL就足够了。样品不足 60 μL 时,不同样品之间的
    体积需要保持一致, 体积不足的部分用制备或稀释样品时所
    使用的溶液补足。
    6. 可以同时设置加入200 μL水或PBS的2-3个孔为阴性对
    照, 这 2-3个孔仅仅加入水或 PBS, 不再加入任何其他试剂。
    7. 检测时,如无 540 nm滤光片,520-560 nm的滤光片也可
    以使用
    标准品、样品和检测试剂
    空白对照 标准品 样品
    标准品 - 60 μL
    样品 - - x μL
    用于样品稀释的溶液 60 μL - (60-x) μL
    NADPH (2mM) 5 μL 5 μL 5 μL
    FAD 10 μL 10 μL 10 μL
    Nitrate Reductase 5 μL 5 μL 5 μL
    混匀后,37℃孵育 30 min
    LDH Buffer 10 μL 10 μL 10 μL
    LDH 10 μL 10 μL 10 μL
    混匀后,37℃孵育 30 min
    Griess Reagent I 50 μL 50 μL 50 μL
    Griess Reagent II 50 μL 50 μL 50 μL
    混匀后,室温(20-30℃)孵育10 min 后,测定540 nm处
    吸光度值
    本产品仅用于科研

    总 N-O 检测试剂盒(Total Nitric Oxide Assay Kit)