上海晅科生物科技有限公司
    咨询热线
    021-62457717
      产品分类
    SuperViewTM 488 Caspase-3底物, 1 mM in DMSO
    物品单位 价格 品牌
    2200 XKBio
    • 产地:上海
    • 型号:100 μL
    • 货号:XK1005
    • 发布日期: 2022-03-26
    • 更新日期: 2022-03-26
    产品详细说明
    产地 上海
    品牌 XKBio
    货号 XK1005
    用途范围 科研
    纯度 100%
    CAS编号
    规格 100 μL
    是否进口

    SuperView™488 Caspase-3底物 产品说明书
    SuperView™488 Caspase-3底物
    产品货号:XK1005
    S1006:XK1005
    产品规格:100 μL
    储存条件
    -20℃避光干燥保存,有效期见外包装。
    光谱特性
    SuperView™ 488:Ex/Em = 500/530 nm (with DNA)
    产品介绍
    SuperView™ 488 Caspase-3 Substrate 基于caspase-3/7
    活力检测细胞凋亡提供了有效的工具, 适用于荧光显微术和
    流式细胞术。
    相比其他基于(FLICA)分析的 caspase 的荧光底物或
    荧光抑制剂,SuperView™ 488 Caspase-3 Substrate 检测
    caspase-3/7 活性的同时不会抑制完整细胞的凋亡过程。
    Substrate 由耦合caspase-3/7 DEVD识别序列的荧光
    DNA染料组成。Substrate 最初无荧光,穿过细胞膜进入细
    胞质。在凋亡细胞中,caspase-3/7剪切Substrate,释放高亲
    和性的DNA染色,这种染料迁移到细胞核标记DNA并发出
    明亮的绿色荧光。 因此, SuperView™ 488 Caspase-3 Substrate
    是双功能的,既可以检测caspase-3/7活性,又可视化细胞核
    在细胞凋亡进行中的形态学变化。SuperView™ 488染色可
    以甲醛固定并兼容后续免疫染色实验。
    SuperView™ 488 Caspase-3 Substrate 提供 DMSO 和
    PBS 两种溶解形式。PBS 形式可用于对 DMSO毒性敏感的
    细胞,在对 DMSO不敏感的细胞类型中,添加 DMSO 溶解
    形式可增强、SuperView™ 488的孵育染色效果。
    使用方法
    1. 实验优化
    下 面 提 供 的 实 验 步 骤 根 据 终 点 法 检 测 制 度 。
    SuperView™ 488 Substrate也可以进行细胞长时间孵育研究
    (详见后“常见问题”)。细胞密度、底物浓度和抑制剂浓
    度可能需要优化。 底物浓度可能在1-10 μM之间。细胞
    可以在培养基、PBS或其他您所选择的缓冲液中孵育底物。
    对于贴壁细胞,我们建议更换新鲜含有底物的培养基,以防
    背景的不均一性。 底物孵育后换液或洗涤细胞的操作是自由
    选择的。当在DMSO不敏感的细胞类型中使用S1006时,添
    加DMSO可能会加强SuperView™ 488染色效果。


    2. 对照
    我们建议您设定以下对照:
    A. 阴性对照:不诱导凋亡的细胞
    B. 阳性对照:诱导凋亡的细胞
    3. 流式细胞术
    (1)选择合适的方法诱导细胞凋亡,未经处理的细胞样本
    作为对照。
    (2)贴壁细胞, 进行SuperView™ 488 Caspase-3实验前先用
    胰蛋白酶或其他方法消化细胞。
    (3)用培养基或缓冲液重悬细胞,使细胞密度为106
    /mL。
    (4)吸取0.2 mL细胞悬液至流式细胞试管。
    (5)往200 μL细胞悬液中加入1 μL 1 mM的Substrate 并立
    即混匀使底物浓度为5 μM。不同细胞的 底物浓度可能
    不同,需分析优化。
    (6)室温避光孵育细胞15-30 min。
    (7)加入300 μL培养基或PBS,流式细胞仪分析。检测绿
    色荧光的通道(激发/发射:485/515 nm)。
    4. 荧光显微镜
    (1)选择合适的方法诱导细胞凋亡,未经处理的细胞样本
    作为对照。
    (2) 用含有5 μM Substrate 的新鲜培养基或PBS对细胞进行
    换液(见试验优化)。
    (3)室温下孵育细胞30 min或更长时间。
    (4)细胞可以在含有Substrate的培养基中直接观察。对于
    终点分析法,PBS清洗细胞,荧光显微镜观察细胞,使用观
    察绿色荧光的滤片(激发/发射:485/515 nm)。
    5. 荧光酶标仪
    (1)贴壁细胞在黑色96孔板中进行培养;悬浮细胞,调整
    密度至106
    cells/mL,0.2 mL细胞悬液分装到一孔。
    (2)选择合适的方法诱导细胞凋亡,未经处理的细胞样本
    作为对照。注意:细胞可以在管或瓶中处理,然后转移到96
    孔检测板。
    (3)对于悬浮细胞,直接添加Substrate混匀。对于贴壁细
    胞, 用含有5 μM Substrate的新鲜培养基或PBS对细胞进行换
    液(见试验优化)。
    (4)室温避光孵育细胞15-30 min。
    (5)对于悬浮细胞,轻轻摇晃重悬细胞。荧光酶标仪设置
    激发波长488 nm和发射波长520 nm。 建议贴壁细胞使用底部
    采集方式。贴壁细胞密度的变化可能导致不准确的读数。
    注意事项
    1. 细胞可以用终浓度为1 μM的Hoechst 33342染料共同染
    色,使细胞核产生蓝色荧光染色(激发/发射:346/460 nm)。
    2. SuperView™ 488染色可以被甲醛固定,但与甲醇固定不
    兼容。
    3. 甲醛固定的 SuperView™ 488 染色细胞可以用 0.1%
    Triton X-100处理后进行后续染色,但这样处理后的染色的
    亮度可能会减弱。
    常见问题
    问题 回答
    稳定性如何? 该物质稳定性很好,用户反馈该产品37℃放置4-5天,效果仍然很好
    何时加入细胞中? 该物质实验前期、后期加入细胞均可,它不影响细胞凋亡进程,可实时监测caspase-3活性。
    可用于组织染色吗? 本公司未进行活组织染色实验,有文献报道可用于胚胎组织或三维培养细胞。
    可用于随后的免疫染色吗? 可以。推荐使用2-4%的多聚甲醛室温固定10-15 min,固定时间过长会导致信号下降。
    特异性如何?
    与其它caspase-3底物相似,SuperView™ Caspase-3 Substrate 是基于能被Caspase-7切割的DEVD
    caspase-3 共同序列,其它的半胱天冬酶也可能因与底物特异性序列重叠而切割DEVD 底物。
    适用于哪些细胞? SuperView™ Caspase-3 Substrate 已被报道用于多种原代细胞和科研文献中的永生化细胞中
    本产品仅用于科研

    SuperView™488 Caspase-3底物