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555 Click-iT EdU 成像试剂盒(橙红色荧光)
  • 品牌:XKBio
  • 产地:上海
  • 型号:20T
  • 货号:XK6016S
  • 价格: ¥213/支
  • 发布日期: 2022-03-24
  • 更新日期: 2024-07-12
产品详请
产地 上海
品牌 XKBio
货号 XK6016S
用途 科研
纯度 100%
CAS编号
规格 20T
是否进口

555 Click-iT EdU 成像试剂盒(橙红色荧光)产品说明书
555 Click-iT EdU 成像试剂盒(橙红色荧光)
货号 :XK6016S
产品内容:
组分 规格 20T 100T 500T 1000T 开封后保存温度 稳定性
A. 10 mM EdU 40 μL 0.2 mL 1 mL 2× 1 mL -20℃
开封后按指-定
温度保存可有
效放置一年
B. YF® 488/555/594/647A Azide 4 μL 20 μL 100 μL 200 μL -20℃,避光
C. 10× Click-iT EdU 反应缓冲液 200 μL 1 mL 5 mL 10 mL 2-8℃
D. CuSO4 100 μL 0.5 mL 2× 1.25 mL 5 mL 2-8℃
E. Click-iT EdU 缓冲液添加物 6 mg 30 mg 150 mg 2 × 150 mg 2-8℃
F. Hoechst 33342 5 μL 25 μL 125 μL 250 μL 2-8℃
规格:上述反应次数针对 96孔板培养的细胞,不同容器的具体用量可参考附表 1。
荧光光谱数据:YF® 488 Azide:495/519 nm;YF® 555 Azide:555/565 nm;YF®594 Azide:590/617 nm
 647AAzide:650/670 nm;Hoechst 33342:350/461 nm(bound to DNA)
储存条件
-20℃避光保存,有效期见外包装。开封后,保存温度详见
说明书。


产品介绍
细胞增殖检测是评估细胞健康程度、 遗传毒性及抗肿瘤
药物效果的基础实验手段。检测细胞增殖最 的方法是
BrdU法。EdU法检测试剂盒是BrdU法的革命性突破。EdU
(5-乙炔基-2’-脱氧尿苷)是一种嘧啶类似物,在DNA合成
期整合入DNA双链。EdU法检测基于“点击”反应,一种由铜
催化的叠氮化合物和炔烃作用发生共价反应,形成共价键。
本试剂盒中,EdU含有炔烃,YF® 488/555/594/647A
Azide染料含有叠氮化合物。点击法的EdU标记增殖快速有
效,易于使用。BrdU方法需要DNA变性(如酸变性、热变
性或者用DNase消化)暴露出BrdU,从而方便BrdU抗体结
合;而EdU法只需标准化的多聚甲醛固定和Triton X-100促
渗就可以使检测试剂进入细胞, 只需少量的叠氮化染料即可
非常有效地标记出整合的EdU。
本试剂盒包含EdU法检测所需要的所有组分,可以用于
体外培养细胞的增殖检测。
使用方法
实验材料(自备)
? 10 mM PBS, pH 7.2-7.6
? 4 %多聚甲醛固定液(in PBS)
? 促渗试剂(0.5 %Triton X-100 in PBS)
? 2 mg/mL 甘氨酸溶液(in ddH2O)
? 3 %BSA in PBS, pH 7.2-7.6
实验步骤
1. EdU标记细胞
(1)以每孔4×103
-1×105
细胞接种于96孔板中,培养至正常
状态后进行药物处理或其他刺激处理。
(2)培养基稀释 10 mM EdU至合适浓度,阴性对照组不用
EdU处理。
注:EdU 的标记浓度需根据细胞类型加以调整,建议以 10
μM的初始浓度进行摸索。预实验中,建议设置 EdU浓度梯
度,可参考附表 2和附表 3。
(3)细胞培养箱中孵育一段时间。
注:EdU浓度与孵育时间相关,短时间孵育(<2 h)宜采用
高浓度,如:10~50 μM;长时间孵育(>24 h)宜采用低浓
度,如:1~10 μM;也可参考附表 3。
2. 细胞固定及促渗
(1)孵育完成后,去除培养基。加入50 μL 4 % 多聚甲醛
固定液,室温孵育15-30 min后,去除固定液。
(2)每孔加入50 μL 2 mg/mL甘氨酸溶液,室温孵育5 min,
中和残留的固定液。
(3)以每孔100 μL 3 % BSA洗涤细胞2次。
(4)去除洗涤液,加入100 μL 0.5 % Triton X-100,室温孵
育20 min。
(5) 去除促渗剂, 每孔100 μL的 3% BSA 洗涤液洗涤 2次。
3. EdU检测
注:本参考步骤每个样本使用100 μL的工作液,用户可以根
据自己的样本情况调整用量。
(1)配置1× Click-iT EdU反应缓冲液(组分C):用ddH2O
将组分C稀释10倍。
(2)配置5× Click-iT EdU缓冲液添加物 (组分E) : 加300 μL
的ddH2O至30 mg的E组分管中(终浓度100 mg/mL),混匀
至全部溶解。使用后,剩余储液存放在-20℃,可保存一年,
溶液一旦呈现棕色,则说明有效成分降解不能再用。
注:不同规格的组分E均按照此比例加ddH2O溶解,制备成
5× 储液备用。
(3)准备1× Click-iT EdU缓冲液添加物:用ddH2O稀释5×
Click-iT EdU缓冲液添加物至1×,溶液应现配现用。
(4)依据表 1准备 Click-iT工作液。
表1: Click-iT 工作液
反应组分 以10个孔的
样本数为例
1× Click-iT EdU反应缓冲液 860 μL
CuSO4 (组分 D) 40 μL
YF® 488/555/594/647AAzide(组分B)
1× Click-iT EdU缓冲液添加物 100 μL
总体积 1 mL
(5)每孔加入 100 μL Click-iT工作液,均匀覆盖细胞。
(6)室温避光孵育 30 min。
(7)除去 Click-iT 工作液,以 100 μL 3% BSA 洗涤细胞 2
次后, 去除洗涤液。 如其他无特别要求, 即可进行拍照分析。
4. DNA 复染(可选)
(1)用 100 μL PBS洗涤细胞 1次,去除洗涤液。
(2)用 PBS将 Hoechst 33342(组分 F)稀释 2000倍。
(3)每孔加 100 μL 1× Hoechst 33342溶液,室温避光孵育
15-30 min。
(4)去除 Hoechst 33342 溶液,用 100 μL PBS 洗涤细胞 2
次。
5. 成像及分析
附录:
附表 1.EdU 培养基及染色反应液的参考使用量
96孔板 48孔板 24孔板 12孔板 6孔板 5.5 cm小皿
EdU培养基 100 μL 150 μL 200 μL 500 μL 1 mL 2 mL
染色反应液 100 μL 150 μL 200 μL 500 μL 1 mL 2 mL
附表 2. EdU 的参考孵育时间
细胞系 人胚胎细胞 酵母细胞 鼠成纤维细胞 人宫颈癌细胞 人胚肾细胞系 人神经细胞
细胞周期 ~30 min ~3 h ~18 h ~21 h ~25 h ~5 d
孵育时间 5 min 20 min 2 h 2 h 2 h 1 d
注:(1)EdU孵育时间取决于细胞周期,一般为细胞周期的 1/10至1/5,但大多数细胞系均可采用 2 h孵育时间;
(2)考虑到细胞培养基、温度、湿度、光线等其他因素的影响,细胞周期会有所变化。
附表 3. 文献中EdU 孵育浓度及时间
PubMed ID Reference Cell Line Concentration Time
18272492 Salic A,et al.PNAS.2008 NIH3T3,Hela 10 nM~10 μM 1 h
18521918 Cappella P, et al. Cytometry A.2008 HL-60,A2780,U2OS 1~10 μM 0.5 h
18996411 Chehehasa F, et al.Neurosci Methods.2009 Neurospheres 1~20 μM 24 h
19179371 Limsirichaikul S, et al.Nucleic Acids Res.2009 Primary fibroblasts 10 μM 1,2,4 h
19253396 Warren M, et al. Dev Dyn.2009 Chick embryos 10 μM~2 mM 4 h
19647746 Yu Y, et al. J Immunol Methods.2009 Spleen cells 50 μM 24 h
19544417 Momcilovic O, et al.Stem Cells.2009 Human ES cells 10 μM 0.5 h
20080700 Cinquin O, et al. PNAS.2010 emb-30 1 μM 12 h
20025889 HanW, et al. Life Sci.2009 VSMC 50 μM 2 h
20659708 Huang C, et al. J Genet Genomics.2010 ESC 50 μM 2 h
21310713 Hua H, et al. Nucleic Acids Res.2011 Fission yeaststrains 10 μM 3 h
20824490 Lv L, et al.Mol Cell Biochem.2011 EJ cells 50 μM 4 h
21248284 Yang S, et al.Biol Reprod.2011 GC cells 50 μM 2 h
21227924 Zhang YW, et al. Nucleic Acids Res.2011 U2OS, HT29 30 μM 1.5 h
21829621 Guo T, et al.PloS One. 2011 HIT-T15 50 μM 4 h
21980430 Zeng T, et al.PloS One. 2011 MCF-10A 25 μM 2 h
22012572 Ding D, et al.Int Orthop.2011 C3H10T1/2 10 μM 24 h
22000787 ZengW, et al. Biomaterials.2011 EPC 50 μM 4 h
21913215 Xue Z, et al. J Cell Biochem.2011 SGC7901 25 μM 24 h
22016038 Peng F, et al.Lasera Med Sci.2011 MSC 50 μM 2 h
21878637 Li D, et al. J Biol Chem.2011 HCC 50 μM 2 h
本产品仅用于科研

555 Click-iT EdU 成像试剂盒(橙红色荧光)

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