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      产品分类
    Live & DeadTM 动物细胞活力/毒性检测试剂盒 (Calcein AM, PI)
    物品单位 价格 品牌
    168 XKBio
    • 产地:上海
    • 型号:30T
    • 货号:XK6037S
    • 发布日期: 2022-03-24
    • 更新日期: 2022-03-29
    产品详细说明
    产地 上海
    品牌 XKBio
    货号 XK6037S
    用途范围 科研
    纯度 100%
    CAS编号
    规格 30T
    是否进口
    Live & DeadTM 动物细胞活力/毒性检测试剂盒 (Calcein AM, PI) 产品说明书
    Live & DeadTM 动物细胞活力/毒性检测试剂盒 (Calcein AM, PI)
    产品货号:XK6037S
    产品规格:30T, 150T, 300T
    产品内容:
    组分 L6037S (30T) L6037M (150T) L6037L (300T)
    A. 4 mM Calcein AM(无水 DMSO) 10 μL 50 μL 100 μL
    B. 1.5 mM Propidium(PI in H2O) 50 μL 250 μL 500 μL
    注:本试剂盒次数是按照流式细胞仪一个样品使用 0.5 mL工作液规定的。
    光谱信息:Calcein AM:Ex/Em = 494/517 nm,PI:Ex/Em(结合 DNA)=535/617 nm
    储存条件
    -20?C 避光保存。注意 Calcein AM 容易水解,需密封干燥保
    存,稀释工作液需当天配制。有效期见外包装。
    产品介绍
    Live & DeadTM 动物细胞活力/毒性检测试剂盒
    (Calcein AM, PI)是一种检测动物细胞死活的双荧光染色试
    剂盒。 试剂盒内的两种探针可分别通过测定细胞内酯酶活性
    和质膜完整性从而反映细胞活力。 本试剂盒可用于荧光显微
    镜、流式细胞仪、酶标仪以及其他荧光检测系统。
    本试剂盒可应用于大多数的真核哺乳动物细胞, 包括贴
    壁细胞核的某些组织,但不适用于真菌和酵母。本试剂盒与
    相同用处的台盼蓝相比,更快捷安全且灵敏度更高。
    使用方法
    荧光显微镜检测
    1. 准备工作液
    准备 2 μM Calcein AM 和 4.5 μM PI的染色工液:取出
    Calcein AM 和 PI 原液,恢复至室温。将 30 μL 1.5 mM PI
    和 5 μL 4 mM Calcein AM 与 10 mL PBS 或其他无血清缓冲
    液或培养基混合,涡旋混匀。上述工作液可直接用于细胞染
    色。
    注:Calcein AM 的水溶液易水解,应当天用完。Calcein
    AM 和 PI 的浓度选择依据所用细胞类型不同而有所区别,
    推荐浓度范围为 0.1~10 μM。
    2. 准备细胞并开展实验
    (1)对于贴壁细胞,可直接进行染色。对于悬浮细胞,离
    心收集细胞染色。
    (2)用 1×PBS 充分清洗细胞 2~3次,以充分去除残留的酯
    酶活性。
    (3)对于贴壁细胞,加入足够量的 Calcein AM/PI染色工作
    液。对于悬浮细胞,加入适量的染色工作液,使细胞密度控
    制在 1-5×105
    /mL。
    (4)室温避光孵育 15 min~20 min(如果工作液浓度较高或
    者孵育温度较高,应适当的减少孵育时间)。
    (5)荧光显微镜下观察标记的细胞。
    流式细胞仪检测
    1. 取出试剂,恢复至室温。
    2. 准备 2 μM Calcein AM和 4.5 μM PI 的染色工作液:取出
    Calcein AM和 PI原液, 恢复至室温。 将 30 μL 1.5 mM PI 和
    5 μL 4 mM Calcein AM 与 10 mL PBS或其他无血清缓冲液
    或培养基混合,涡旋混匀。上述工作液可直接于细胞染色。
    3. 用 1×PBS充分清洗细胞2~3次。
    4. 用 0.5 mL 染色工作液悬浮细胞,控制细胞密度为
    1-5×105
    /mL。注:推荐额外准备两管样品,每管只加入一种
    染料(Calcein AM 和 PI),用于流式单染的补偿调节。
    5. 室温避光孵育 15-20 min。
    6. 在 1-2 h内,通过流式细胞仪检测细胞活性。Calcein AM
    可以由488 nm激光激发, 检测荧光发射光谱约在530 nm处,
    PI 发射光约在 617 nm处。
    注:细胞圈门时,注意排除细胞碎片,使用单染管调节
    补偿,双染管流式检测应获得两个相对独立的细胞群:显示

    绿色荧光的活细胞群和红色荧光的死细胞群。

    酶标仪检测
    1. 在 96孔板中培养适量的贴壁或悬浮细胞。
    注意: 用 1%的皂苷或 0.1-0.5%洋地黄皂苷处理细胞 10 min,
    即可得到死细胞。
    2. 准备 2 μM Calcein AM 和 4.5 μM PI 的染色工作液:取出
    Calcein AM 和 PI原液,使其恢复室温。将 30 μL 1.5 mM PI
    和 5 μL 4 mM Calcein AM 与 10 mL PBS 或其他无血清缓冲
    液或培养基混合,涡旋混匀。
    注: 10 mL 的染色液足够染色一个96孔板, 可根据实验需要
    调整染色液的体积。 Calcein AM和PI的浓度可在0.1~10 μM
    之间摸索。
    注:Calcein AM 的水溶液易水解,应当天用完。
    3. 用 1×PBS充分清洗细胞,以充分去除残留的酯酶活性。
    对于贴壁细胞,每孔加 100 μL PBS 清洗细胞。对于悬浮细
    胞,加 100 μL PBS重悬细胞,离心去上清。重复上述操作。
    4. 每孔中加入 100 μL PBS。
    5. 每孔中加入100 μL染色工作液, 使每孔总体积为200 μL,
    Calcein AM 的终浓度为 1 μΜ,PI 的终浓度为 2.25 μM。轻
    轻摇晃培养板,使液体均匀覆盖细胞。
    6. 室温避光孵育 30~45 min。
    7. 酶标仪检测。当酶标仪设置为 fluorescein 时,可以检测
    Calcein AM;当酶标仪设置为 rhodamine 或 Texas Red 时,
    可以检测 PI。根据光谱特性选择 的发射及激发波长。
    注:通过对比样品组与对照组测量的 Relative fluorescence
    values (RFU),可以得出死细胞与活细胞数量的变化。下面
    也提供了另一种数据分析的方法。
    计算某个区域活细胞与死细胞的比例
    下面方法可计算出死细胞与活细胞的比例。 需要的样品
    有死细胞对照组、活细胞对照组及待测样品组。1%的皂苷
    或 0.1-0.5%洋地黄皂苷处理细胞 10 min,即可得到死细胞。
    1. 准备染色工作液及按上述步骤染色细胞。另外,分别准
    备 1 mL 2 μM Calcein AM 和 4 μM PI 溶液,按照下列指示
    来染色对照组。
    2. 样品组及对照组测量:
    A. 样品组在 517 nm 的测量值,记为 Calcein AM 和
    PI=F(517)sam。
    B. 样品组在 617 nm 的测量值,记为 Calcein AM 和
    PI=F(617)sam。
    C. 死细胞 PI 单染对照组在 617 nm 的测量值,记为
    PI=F(617)max。
    D. 死细胞 Calcein AM 单染对照组在 617 nm的测量值,记
    为 Calcein AM=F(617)min。
    E. 活细胞 PI 单染对照组在 517 nm 的测量值,记为
    PI=F(517)min。
    F. 活细胞 Calcein AM 单染对照组在 517 nm 的测量值,记
    为 Calcein AM=F(517)max。
    G. 没有细胞的空白对照孔(加染料或不加染料均可),517
    nm处的检测值记为F(517)0。
    H. 没有细胞的空白对照孔(加染料或不加染料均可),617
    nm处的检测值记为F(617)0。
    3. 根据测量数据计算死细胞与活细胞的比例:
    % Live Cells = (A - E) ÷ (F - E)
    % Dead Cells = (B - D) ÷ (C - D)
    注: 所有的F(517)和F(617)都减去相应的F(517)0和F(617)0。
    确定某个区域活细胞与死细胞的比例
    通过制作 517 nm和 617 nm 处的荧光光谱标准曲线,
    可以确定死细胞与活细胞的数量, 每个染料的荧光强度分别
    与样品中死细胞或活细胞的数量成直线型关系。

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    本产品仅用于科研

    Live & DeadTM 动物细胞活力/毒性检测试剂盒 (Calcein AM, PI)