Live & DeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒（Calcein AM, EthD-1）产品说明书
Live & DeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒（Calcein AM, EthD-1）
产品货号：XK6023S
产品规格：30T, 150T, 300T
产品内容：
组分 L6023S (30T) L6023M (150T) L6023L (300T)
A: Calcein AM(4 mM in anhydrous DMSO) 10 μL 50 μL 100 μL
B: Ethidium homodimer-1(EthD-I)(2 mM in DMSO/H2O 1:4(v/v)) 30 μL 150 μL 300 μL
注：本试剂盒次数是按照流式细胞仪一个样品使用 0.5 mL 工作液规定的。
光谱信息：Calcein AM：Ex/Em = 494/517 nm；EthD-I：Ex/Em = 528/617 nm（结合 DNA）
储存条件
-20?C 避光保存。注意 Calcein AM 容易水解，需密封干燥保
存，稀释工作液需当天配制。有效期见外包装。
产品介绍
Live & DeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒（Calcein
AM, EthD-1） 是一种为动物细胞死活检测提供双荧光染色的
试剂盒。 试剂盒内的两种探针可分别测定细胞内酯酶活性和
质膜完整性从而反映细胞活力。 本试剂盒可用于荧光显微镜、
流式细胞仪、酶标仪以及其他荧光检测系统。
Live & DeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒（Calcein
AM, EthD-1）可以应用于大多数的真核哺乳动物细胞，包括

贴壁细胞核的某些组织，但不适用于真菌和酵母。该试剂盒

与相同用处的台盼蓝相比，更快捷安全且灵敏度更高。

使用方法

荧光显微镜检测
1. 准备工作液
准备 2 μM Calcein AM 和 4 μM EthD-I 的染色工液：取
出Calcein AM和EthD-I原液， 使其恢复室温。 将20 μL 2 mM
EthD-I和 5 μL 4 mM Calcein AM 与10 mL PBS 或其他无血
清缓冲液或培养基混合，涡旋混匀。上述工作液可直接用于
细胞染色。
注：Calcein AM的水溶液易水解， 应当天用完。Calcein
AM 和 EthD-I 的浓度选择依据所用细胞类型不同而有所区
别，推荐浓度范围为 0.1~10 μM。
2. 准备细胞并开展实验
（1）贴壁细胞可直接染色。悬浮细胞需离心收集细胞再染
色。
（2）用 1×PBS 充分清洗细胞 2~3次，以充分去除残留的酯
酶活性。
（3）吸弃PBS 溶液，对于贴壁细胞，加入足够量的 Calcein
AM/EthD-I 染色工作液。对于悬浮细胞，加入适量的染色工
作液，使细胞密度控制在 1- 5×105
/mL。
（4） 室温避光孵育 15 min ~ 20 min (如果工作液浓度较高或
者孵育温度较高，应适当的减少孵育时间)。
（5）荧光显微镜下观察标记的细胞。
流式细胞仪检测
1. 取出试剂，恢复至室温。
2. 准备 2 μM Calcein AM 和 4 μM EthD-I 的染色工作液：取
出 Calcein AM 和EthD-I 原液， 恢复至室温。将 20 μL 2 mM
EthD-I和 5 μL 4 mM Calcein AM 与 10 mL PBS或其他无血
清缓冲液或培养基涡旋混匀。工作液可直接于细胞染色。
3. 用 1× PBS充分清洗细胞 2~3次。
4. 用 0.5 mL 染色工作液悬浮细胞，控制细胞密度为
1-5×105
/mL。
注：我们推荐准备两管额外的样品，每管只加入一种染
料（Calcein AM 和 EthD-I），用于流式单染的补偿调节。
5. 室温避光孵育 15-20 min。
6. 在 1-2 h内，通过流式细胞仪检测细胞活性。Calcein AM
可以由488 nm激光激发， 检测荧光发射光谱约在530 nm处，
EthD-I发射光谱约在 610 nm处。
注：细胞圈门时，注意排除细胞碎片，使用单染管调节
补偿，双染管流式检测应获得两个相对独立的细胞群：显示
绿色荧光的活细胞群和红色荧光的死细胞群。
酶标仪检测
1. 在 96孔板中培养适量的贴壁或悬浮细胞。
注： 用 1%的皂苷 0.1-0.5%洋地黄皂苷处理细胞10 min，
即可得到死细胞。
2. 准备 2 μM Calcein AM 和 4 μM EthD-I的染色工作液：
取出 Calcein AM 和 EthD-I原液，使其恢复室温。将 20 μL 2
mM EthD-I 和 5 μL 4 mM Calcein AM10 mL PB 或其他无血
清缓冲液或培养基混合，涡旋混匀。
注：10 mL 的染色液足够染色一个 96 孔板，可根据实
验需要调整染色液的体积。Calcein AM 和 EthD-I 的浓度可
在 0.1~10 μM 之间摸索。
注：Calcein AM 的水溶液易水解，应当天用完。EthD-I
工作液可保存在-20℃，至少可保存一年。
3. 用 1× PBS充分清洗细胞，以充分去除残留的酯酶活性。
对于贴壁细胞，每孔加 100 μL PBS 清洗细胞。对于悬浮细
胞，加 100 μL PBS重悬细胞，离心去上清。重复上述操作。
4. 每孔中加入 100 μL PBS。
5. 每孔中加入100 μL染色工作液， 使每孔总体积为200 μL，
Calcein AM 的终浓度为 1 μM，EthD-I 的终浓度为 2 μM。
轻轻摇晃培养板，使液体均匀覆盖细胞。
6. 室温避光孵育 30~45 min。
7. 酶标仪检测。当酶标仪设置为 fluorescein 时，可以检测
Calcein AM；当酶标仪设置为 rhodamine 或 Texas Red 时，
可以检测 EthD-I。 根据光谱特性选择 的发射及激发波长。
注 ： 通 过 对比 样 品 组 与 对 照 组测 量 的 Relative
fluorescence values (RFU)，可以得出死细胞与活细胞数量的
变化。下面也提供了另一种数据分析的方法。
计算某个区域活细胞与死细胞的比例
下面方法可以计算出死细胞与活细胞的比例。 需要的
样品有死细胞对照组、活细胞对照组及要测的样品组。用
1%的皂苷或 0.1- 0.5%洋地黄皂苷处理细胞 10 min，即可得
到死细胞。
1. 准备染色工作液及按上述步骤染色细胞。另外，分别准
备 1 mL 2 μM Calcein AM 和 4 μM EthD-I 溶液，按照下列指
示来染色对照组。
2. 样品组及对照组测量：
A. 样品组在 645 nm 的测量值，记为 Calcein AM 和
EthD-I=F(645)sam。
B. 样品组在 530 nm 的测量值，记为 Calcein AM 和
EthD-I=F(530)sam。
C. 活细胞 EthD-I 单染对照组在 530 nm 的测量值，记为
EthD-I=F(530)min。
D. 活细胞 Calcein AM 单染对照组在 530 nm的测量值，记
为 Calcein AM=F(530)max。
E. 没有细胞的空白对照孔(加染料或不加染料均可)， 530 nm
处的检测值记为 F(530)0。
F. 没有细胞的空白对照孔(加染料或不加染料均可)， 645 nm
处的检测值记为 F(645)0。
3. 根据测量数据计算死细胞与活细胞的比例：
% Live Cells = (B - E) ÷ (F - E)
% Dead Cells = (A - D) ÷ (C - D)
确定某个区域活细胞与死细胞的比例
通过制作 530 nm和645 nm处的荧光光谱标准曲线， 可以确
定死细胞与活细胞的数量， 每个染料的荧光强度分别与样品
中死细胞或活细胞的数量成直线型关系。

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本产品仅用于科研

Live & DeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒（Calcein AM, EthD-1）