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      产品分类
    Live & DeadTM 动物细胞活力/毒性检测试剂盒 (Calcein AM, EthD-1)
    物品单位 价格 品牌
    198 XKBio
    • 产地:上海
    • 型号:30T
    • 货号:XK6023S
    • 发布日期: 2022-03-24
    • 更新日期: 2022-03-29
    产品详细说明
    产地 上海
    品牌 XKBio
    货号 XK6023S
    用途范围 科研
    纯度 100%
    CAS编号
    规格 30T
    是否进口
    Live & DeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(Calcein AM, EthD-1)产品说明书
    Live & DeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(Calcein AM, EthD-1)
    产品货号:XK6023S
    产品规格:30T, 150T, 300T
    产品内容:
    组分 L6023S (30T) L6023M (150T) L6023L (300T)
    A: Calcein AM(4 mM in anhydrous DMSO) 10 μL 50 μL 100 μL
    B: Ethidium homodimer-1(EthD-I)(2 mM in DMSO/H2O 1:4(v/v)) 30 μL 150 μL 300 μL
    注:本试剂盒次数是按照流式细胞仪一个样品使用 0.5 mL 工作液规定的。
    光谱信息:Calcein AM:Ex/Em = 494/517 nm;EthD-I:Ex/Em = 528/617 nm(结合 DNA)
    储存条件
    -20?C 避光保存。注意 Calcein AM 容易水解,需密封干燥保
    存,稀释工作液需当天配制。有效期见外包装。
    产品介绍
    Live & DeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(Calcein
    AM, EthD-1) 是一种为动物细胞死活检测提供双荧光染色的
    试剂盒。 试剂盒内的两种探针可分别测定细胞内酯酶活性和
    质膜完整性从而反映细胞活力。 本试剂盒可用于荧光显微镜、
    流式细胞仪、酶标仪以及其他荧光检测系统。
    Live & DeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(Calcein
    AM, EthD-1)可以应用于大多数的真核哺乳动物细胞,包括

    贴壁细胞核的某些组织,但不适用于真菌和酵母。该试剂盒

    与相同用处的台盼蓝相比,更快捷安全且灵敏度更高。

    使用方法

    荧光显微镜检测
    1. 准备工作液
    准备 2 μM Calcein AM 和 4 μM EthD-I 的染色工液:取
    出Calcein AM和EthD-I原液, 使其恢复室温。 将20 μL 2 mM
    EthD-I和 5 μL 4 mM Calcein AM 与10 mL PBS 或其他无血
    清缓冲液或培养基混合,涡旋混匀。上述工作液可直接用于
    细胞染色。
    注:Calcein AM的水溶液易水解, 应当天用完。Calcein
    AM 和 EthD-I 的浓度选择依据所用细胞类型不同而有所区
    别,推荐浓度范围为 0.1~10 μM。
    2. 准备细胞并开展实验
    (1)贴壁细胞可直接染色。悬浮细胞需离心收集细胞再染
    色。
    (2)用 1×PBS 充分清洗细胞 2~3次,以充分去除残留的酯
    酶活性。
    (3)吸弃PBS 溶液,对于贴壁细胞,加入足够量的 Calcein
    AM/EthD-I 染色工作液。对于悬浮细胞,加入适量的染色工
    作液,使细胞密度控制在 1- 5×105
    /mL。
    (4) 室温避光孵育 15 min ~ 20 min (如果工作液浓度较高或
    者孵育温度较高,应适当的减少孵育时间)。
    (5)荧光显微镜下观察标记的细胞。
    流式细胞仪检测
    1. 取出试剂,恢复至室温。
    2. 准备 2 μM Calcein AM 和 4 μM EthD-I 的染色工作液:取
    出 Calcein AM 和EthD-I 原液, 恢复至室温。将 20 μL 2 mM
    EthD-I和 5 μL 4 mM Calcein AM 与 10 mL PBS或其他无血
    清缓冲液或培养基涡旋混匀。工作液可直接于细胞染色。
    3. 用 1× PBS充分清洗细胞 2~3次。
    4. 用 0.5 mL 染色工作液悬浮细胞,控制细胞密度为
    1-5×105
    /mL。
    注:我们推荐准备两管额外的样品,每管只加入一种染
    料(Calcein AM 和 EthD-I),用于流式单染的补偿调节。
    5. 室温避光孵育 15-20 min。
    6. 在 1-2 h内,通过流式细胞仪检测细胞活性。Calcein AM
    可以由488 nm激光激发, 检测荧光发射光谱约在530 nm处,
    EthD-I发射光谱约在 610 nm处。
    注:细胞圈门时,注意排除细胞碎片,使用单染管调节
    补偿,双染管流式检测应获得两个相对独立的细胞群:显示
    绿色荧光的活细胞群和红色荧光的死细胞群。
    酶标仪检测
    1. 在 96孔板中培养适量的贴壁或悬浮细胞。
    注: 用 1%的皂苷 0.1-0.5%洋地黄皂苷处理细胞10 min,
    即可得到死细胞。
    2. 准备 2 μM Calcein AM 和 4 μM EthD-I的染色工作液:
    取出 Calcein AM 和 EthD-I原液,使其恢复室温。将 20 μL 2
    mM EthD-I 和 5 μL 4 mM Calcein AM10 mL PB 或其他无血
    清缓冲液或培养基混合,涡旋混匀。
    注:10 mL 的染色液足够染色一个 96 孔板,可根据实
    验需要调整染色液的体积。Calcein AM 和 EthD-I 的浓度可
    在 0.1~10 μM 之间摸索。
    注:Calcein AM 的水溶液易水解,应当天用完。EthD-I
    工作液可保存在-20℃,至少可保存一年。
    3. 用 1× PBS充分清洗细胞,以充分去除残留的酯酶活性。
    对于贴壁细胞,每孔加 100 μL PBS 清洗细胞。对于悬浮细
    胞,加 100 μL PBS重悬细胞,离心去上清。重复上述操作。
    4. 每孔中加入 100 μL PBS。
    5. 每孔中加入100 μL染色工作液, 使每孔总体积为200 μL,
    Calcein AM 的终浓度为 1 μM,EthD-I 的终浓度为 2 μM。
    轻轻摇晃培养板,使液体均匀覆盖细胞。
    6. 室温避光孵育 30~45 min。
    7. 酶标仪检测。当酶标仪设置为 fluorescein 时,可以检测
    Calcein AM;当酶标仪设置为 rhodamine 或 Texas Red 时,
    可以检测 EthD-I。 根据光谱特性选择 的发射及激发波长。
    注 : 通 过 对比 样 品 组 与 对 照 组测 量 的 Relative
    fluorescence values (RFU),可以得出死细胞与活细胞数量的
    变化。下面也提供了另一种数据分析的方法。
    计算某个区域活细胞与死细胞的比例
    下面方法可以计算出死细胞与活细胞的比例。 需要的
    样品有死细胞对照组、活细胞对照组及要测的样品组。用
    1%的皂苷或 0.1- 0.5%洋地黄皂苷处理细胞 10 min,即可得
    到死细胞。
    1. 准备染色工作液及按上述步骤染色细胞。另外,分别准
    备 1 mL 2 μM Calcein AM 和 4 μM EthD-I 溶液,按照下列指
    示来染色对照组。
    2. 样品组及对照组测量:
    A. 样品组在 645 nm 的测量值,记为 Calcein AM 和
    EthD-I=F(645)sam。
    B. 样品组在 530 nm 的测量值,记为 Calcein AM 和
    EthD-I=F(530)sam。
    C. 活细胞 EthD-I 单染对照组在 530 nm 的测量值,记为
    EthD-I=F(530)min。
    D. 活细胞 Calcein AM 单染对照组在 530 nm的测量值,记
    为 Calcein AM=F(530)max。
    E. 没有细胞的空白对照孔(加染料或不加染料均可), 530 nm
    处的检测值记为 F(530)0。
    F. 没有细胞的空白对照孔(加染料或不加染料均可), 645 nm
    处的检测值记为 F(645)0。
    3. 根据测量数据计算死细胞与活细胞的比例:
    % Live Cells = (B - E) ÷ (F - E)
    % Dead Cells = (A - D) ÷ (C - D)
    确定某个区域活细胞与死细胞的比例
    通过制作 530 nm和645 nm处的荧光光谱标准曲线, 可以确
    定死细胞与活细胞的数量, 每个染料的荧光强度分别与样品
    中死细胞或活细胞的数量成直线型关系。

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    本产品仅用于科研

    Live & DeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(Calcein AM, EthD-1)