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Biotin TUNEL细胞凋亡试剂盒
  • 品牌:XKBio
  • 产地:上海
  • 型号:20T
  • 货号:XK6068S
  • 价格: ¥1106/支
  • 发布日期: 2022-03-24
  • 更新日期: 2024-12-04
产品详请
产地 上海
品牌 XKBio
货号 XK6068S
用途 科研
包装规格 20T
纯度 100%
CAS编号
是否进口
Biotin TUNEL细胞凋亡试剂盒产品说明书
Biotin TUNEL细胞凋亡试剂盒
产品货号:XK6068S
产品规格:20T, 50T
产品内容:
组分
规格 XK6068S(20T)XK6068S(50T)
A. Biotin TUNEL Reaction Buffer 1 mL 2 × 1.25 mL
B. TdT酶 20 μL 50 μL
C. Streptavidin-HRP 20 μL 50 μL
D. Streptavidin-HRP稀释液 1 mL 2×1.25 mL
E. DAB显色液A 100 μL 250 μL
F. DAB显色液B 1 mL 2×1.25 mL
G. DAB显色液C 50 μL 125 μL
H. Proteinase K (2 mg/mL) 40 μL 100 μL
I. DNase I (2 U/μL) 5 μL 13 μL
J. 10 × DNase I Buffer 100 μL 260 μL
储存条件
本产品应置于-20℃储存,组分 A、E、G 需避光,避
免反复冻融。有效期见外包装。注:组分 A、E、F、G 使
用时请佩戴口罩、手套,接触皮肤,请立即用大量水冲洗。
产品介绍
细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体 DNA 的降解,
这种降解非常特异并有规律,所产生的不同长度的 DNA 片
段约为 180 bp-200 bp 的整数倍,表现为琼脂糖凝胶电泳中
呈现特异的梯状 Ladder 图谱,本试剂盒采用 TUNEL 法,
应用末端脱氧核糖核苷酸转移酶 (Terminal Deoxynucleotidyl
Transferase, TdT)在凋亡细胞断裂 DNA 的 3′-OH 末端催化
掺入生物素(Biotin)标记的 dUTP (Biotin-X-dUTP)。随后
和 辣 根 过 氧 化 物 酶 (HRP) 标 记 的 Streptavidin
(Streptavidin-HRP)特异结合, 在 HRP 的催化下通过
DAB 显色来显示凋亡细胞,从而可以通过普通光学显微镜
观察并计数凋亡细胞。 由于正常的或正在增值的细胞几乎没
有 DNA 的断裂,因而没有 3′-OH 形成,很少能被染色。
TUNEL 法可以选择性的对凋亡细胞直接进行原位检测,而
非坏死细胞或因辐照和药物 而造成的DNA链断裂的细

胞,是一种更快速、直接的检测手段。

使用方法
实验材料(自备)
? PBS缓冲液(pH~7.4)
? 4%多聚甲醛(PBS配制)
? PBS配制 0.3% H2O2(新鲜配制)
? 70%乙醇(自选)
? 脱蜡溶剂(石蜡切片样本)2 / 3
US EVERBRIGHT
生物荧光试剂

本产品仅用于科研
实验步骤
1. 样本准备:
(1)细胞样品
a. 可选: 准备一份阴性对照样本 (加入不含TdT酶的TUNEL
反应液)。
b. PBS 清洗细胞两次。
c. 细胞固定:加入适量 4%多聚甲醛(pH 7.4)溶液,4℃放
置 30 min。
d. PBS 清洗细胞两次。
e. 通透细胞:细胞可用配制于 PBS 中的 0.2% Triton X-100
溶液通透,室温放置 20 min。
f. PBS清洗细胞两次。
g. 封闭细胞: 每孔加入100 μL左右的配制于PBS中的0.3 %
H2O2溶液,轻敲孔板使其充分覆盖细胞,室温避光封闭 30
min,用 1×PBS 清洗细胞2 次;
(2)石蜡组织切片
a. 室温下用二甲苯浸泡石蜡组织切片 2次, 每次 5 min,以
脱掉石蜡。
注:二甲苯有毒,易挥发,请在通风橱中进行此操作。
b. 室温下,将切片样本浸没于无水乙醇中漂洗 2次,每次 5
min。
c. 室温下,将切片样本连续浸没在不同浓度梯度的乙醇
(95%、90%、80%、70%)中,每种浓度各漂洗 1 次,每
次 5 min。
d. 室温下,将切片浸没于纯水中漂洗 3 min,再将切片浸没
于1×PBS中漂洗3 min, 用滤纸小心吸干切片样本周围液体。
e. 用免疫组化笔围描绘样品轮廓,以便下游通透与标记。
f. 按1: 100的比例, 将 2 mg/mL的蛋白酶 K 溶液用1 × PBS
稀释至终浓度 20 μg/mL,在每个样本上滴加 100 μL,使溶
液覆盖全部样本区域,室温孵育 20 min(蛋白酶 K 的孵育
时间、温度需根据不同类型组织样本进行优化)。
注:蛋白酶 K 可以帮助渗透组织,时间短达不到通透效果,
但延长孵育时间可能导致切片脱落。 一般情况下, 厚度 4 μm
孵育 10 min,厚度30 μm孵育 30 min。
g. PBS 浸润清洗切片两次,每次5 min。
h. 封闭:加入适量配制于 PBS 中的 0.3% H2O2溶液(新鲜
配制),室温孵育 30 min,以灭活切片内源的过氧化氢酶。
i. PBS 浸润清洗切片两次,每次 5 min,用滤纸吸去多余的
液体,将处理好的样品放在湿盒中保持湿润。
(3)冰冻组织切片
a. 将冰冻切片放置于室温的片架上,室温 20 min,晾干。
b. 将载玻片浸没在 4%多聚甲醛溶液中,室温固定 30 min。
c. PBS浸润清洗切片两次,每次 5 min。
d. 用滤纸小心吸干载玻片上样本周围的液体。
e. 按1:100的比例,将 2 mg/mL 的蛋白酶 K 溶液用 1× PBS
稀释至终浓度 20 μg/mL。每个样本上滴加 100 μL,使溶液
覆盖全部样本区域,室温孵育 10 min(Proteinase K 的孵育
时间、温度需根据不同类型组织样本进行优化)。
注:蛋白酶 K 可以帮助渗透组织,时间短达不到通透效果,
但延长孵育时间可能导致切片脱落。 一般情况下, 厚度 4 μm
孵育 10 min,厚度 30 μm孵育 30 min。
f. PBS 浸润清洗切片两次,每次5 min。
g. 封闭:加入适量配制于 PBS 中的 0.3% H2O2溶液(新鲜
配制),室温孵育 30 min,以灭活切片内源的过氧化氢酶。
h. PBS清洗样品 3次,每次 5min,用滤纸吸去多余的液体,
将处理好的样品放在湿盒中保持湿润。
(4)阳性处理(仅阳性对照进行此步骤,其他样品直接进
行 TUNEL反应步骤)
a. 按 1:10 的比例用 diH2O 将 10× DNase I Buffer 稀释成 1 ×
DNase I Buffer 备用。
b. 滴加 100 μL 1× DNase I Buffer 到已通透的样本上,室温
平衡 5 min。
c. 用 1× DNase I Buffer 以 1:100 稀释 DNase I (2 U/μL),使
其为终浓度 20 U/mL的工作液。
d. 轻轻吸掉多余液体, 加入 100 μL浓度为 20 U/mL DNase I
工作液,室温孵育 10 min。
e. 轻轻吸掉多余液体,PBS 清洗样品 2次。
2. TUNEL 反应
(1)配制TUNEL 反应液(即用即配):3 / 3
US EVERBRIGHT
生物荧光试剂

本产品仅用于科研
1 个
样品
5个
样品
10个
样品
TdT酶 1 μL 5 μL 10 μL
Biotin TUNEL
Reaction Buffer
49 μL 245 μL 490 μL
TUNEL 反应
液总体积
50 μL 250 μL 500 μL
(2)每个样品加入 50 μL TUNEL 反应液,37℃避光孵育
60 min,组织样本需要 2 h(阴性对照样品加入不含 TdT酶
的 TUNEL反应液)。
注:50 μL Streptavidin-HRP 工作液适合涂片、切片或 96孔
板、48孔板、24孔板或 12孔板的一个孔,如果是 6孔板,
建议使用 100 μL。为防止 Streptavidin-HRP 工作液蒸发,建
议在样品上覆上防蒸发膜。
(3)PBS清洗反应后的样品 3次,每次 5 min。
3. Streptavidin-HRP 工作液和 DAB 显色液的配制
(1)Streptavidin-HRP工作液的配制(即用即配):
1个
样品
5个
样品
10个
样品
Streptavidin-HRP 1 μL 5 μL 10 μL
Streptavidin-HRP
稀释液
49 μL 245 μL 490 μL
Streptavidin-HRP
工作液总体积
50 μL 250 μL 500 μL
(2)DAB 显色液的配制(即用即配):
1 个样品 5个样品 10个样品
DAB显色液A 5 μL 25 μL 50 μL
DAB显色液B 42.5 μL 212.5 μL 425 μL
DAB显色液C 2.5 μL 12.5 μL 25 μL
DAB 显色液总体积 50 μL 250 μL 500 μL
Biotin TUNEL细胞凋亡试剂盒
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