上海晅科生物科技有限公司
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      产品分类
    SuperViewTM 488 Caspase-3 活细胞分析试剂盒
    物品单位 价格 品牌
    680 XKBio
    • 产地:上海
    • 型号:25T
    • 货号:XK6007S
    • 发布日期: 2022-03-24
    • 更新日期: 2022-03-24
    产品详细说明
    产地 上海
    品牌 XKBio
    货号 XK6007S
    用途范围 科研
    纯度 100%
    CAS编号
    规格 25T
    是否进口
    SuperViewTM 488 Caspase-3 活细胞分析试剂盒产品说明书
    SuperViewTM 488 Caspase-3 活细胞分析试剂盒
    产品货号:XK6007S
    产品规格:25T, 100T
    产品内容:
    组分 S6007S(25T) S6007L(100T)
    A. SuperView 488 Caspase-3 Substrate, 0.2 mM in DMSO 125 μL 500 μL
    B. Caspase-3 inhibitor Ac-DEVD-CHO, 2 mM in DMSO 20 μL 100 μL
    储存条件
    储存于 4oC,其中A 组分需避光,有效期见外包装。
    光谱特性
    SuperView 488:Abs/Em = 500/530 nm (with DNA)
    产品介绍
    SuperView 488 Caspase-3 活细胞分析试剂盒包含
    SuperView 488 Caspase-3 底 物 和 Ac-DEVD-CHO
    Caspase-3/7 抑制剂。 SuperView 488 Caspase-3 Substrate 为基
    于 Caspase-3/7 活力检测细胞凋亡提供了有效的工具,适用
    于荧光显微术和流式细胞术。
    相比其他基于(FLICA)分析的 Caspase 的荧光底物或
    荧 光 抑 制 剂 , SuperView 488 Caspase-3 Substrate 检 测
    Caspase-3/7 活性的同时不会抑制完整细胞的凋亡过程。
    Substrate 由耦合 Caspase-3/7 DEVD 识别序列的荧光 DNA
    染料组成。Substrate 最初无荧光,穿过细胞膜进入细胞质。
    在凋亡细胞中,Caspase-3/7 剪切 Substrate,释放高亲和性
    的 DNA 染色,这种染料迁移到细胞核标记 DNA 并发出明
    亮的绿色荧光。因此,SuperView 488 Caspase-3 Substrate 是
    双功能的,既可以检测 Caspase-3/7 活性,又可视化细胞核
    在细胞凋亡进行中的形态学变化。SuperView 488 染色可以
    甲醛固定并兼容后续免疫染色实验。
    使用方法
    1. 实验优化
    下面提供的实验步骤根据终点法检测制度。SuperView
    488 Substrate 也可以进行细胞长时间孵育课程研究(见下一
    页常见问题)。细胞密度、底物浓度和抑制剂浓度可能需要
    优化。 底物浓度可能在 1-10 μM 之间。细胞可以在培养
    基、PBS或其他您所选择的缓冲液中孵育底物。对于贴壁细
    胞,我们建议更换新鲜含有底物的培养基,以防背景的不均
    一性。底物孵育后换液或洗涤细胞的操作是自由选择的。
    2. 对照
    我们建议您设定以下对照:
    A. 阴性对照:不诱导凋亡的细胞
    B. 阳性对照:诱导凋亡的细胞
    C. 抑制剂对照:诱导细胞凋亡同时(或提前 10-30 min)孵
    育Caspase-3/7抑制剂, 再添加SuperView 488 Caspase-3
    底物。
    3. Ac-DEVD-CHO Caspase-3 抑制剂对照
    试剂盒中的 Caspase-3/7抑制剂 Ac-DEVD-CHO 可以用
    来确认 Caspase-3/7 依赖于 Superview 488 的荧光信号。 对于
    抑制剂对照,抑制剂的终浓度应该至少是底物浓度的 2 倍
    (例如当使用 5 μM SuperView 488 底物时,Ac-DEVD-CHO
    浓度为10 μM)。添加底物前在室温下孵育 Ac-DEVD-CHO
    15-30 min,加入底物后,孵育液中继续保留抑制剂。


    本产品仅用于科研
    Ac-DEVD-CHO 是可逆的竞争性抑制剂。在某些细胞
    类型, 有效的 Caspase-3/7抑制剂需要使用不可逆的抑制剂,
    如 Z-DEVD-FMK,或需要在凋亡诱导之前或诱导过程中添
    加抑制剂。
    4. 流式细胞术
    (1)选择合适的方法诱导细胞凋亡,未经处理的细胞样本
    作为对照。
    (2)贴壁细胞,执行 SuperView 488 Caspase-3 实验前先用
    胰蛋白酶或其他方法消化细胞。
    (3)用培养基或缓冲液重悬细胞,使细胞密度为 106
    个/mL
    (4)吸取 0.2 mL 细胞悬液至流式细胞试管。
    (5)抑制剂对照样本,用 Ac-DEVD-CHO 处理细胞(见上
    文)。
    (6)200 μL细胞悬液中加入 5 μL 0.2 mM 的 Substrate 并立
    即混匀使底物浓度为 5 μM。不同细胞的 底物浓度可能
    不同,需分析优化。
    (7)室温避光孵育细胞 15-30 min。
    (8)加入 300 μL 培养基或 PBS,流式细胞仪分析。检测
    绿色荧光的通道(激发/发射:485/515 nm)。
    5. 荧光显微术
    (1)选择合适的方法诱导细胞凋亡,未经处理的细胞样本
    作为对照。
    (2)抑制剂对照样本,用 Ac-DEVD-CHO 处理细胞(见上
    文)。
    (3)用含有 5 μM Substrate 的新鲜培养基或 PBS 对细胞进
    行换液(见试验优化)。对于抑制剂对照组,抑制剂与底物
    一同孵育。
    (4)室温下孵育细胞 30 min 或更长时间。
    6. 荧光酶标仪
    (1)贴壁细胞生长在黑色 96孔板中;悬浮细胞,调整密至
    106
    个/mL,0.2 mL 细胞悬液分装到一孔。
    (2)选择合适的方法诱导细胞凋亡,未经处理的细胞样本
    作为对照。 注意: 细胞可能在管或瓶中处理, 然后转移到 96
    孔检测板。
    (3)抑制剂对照样本,用 Ac-DEVD-CHO 处理细胞(见上
    文)。
    (4)对于悬浮细胞,直接添加 Substrate 混匀。对于贴壁细
    胞, 用含有 5 μM Substrate 的新鲜培养基或 PBS 对细胞进行
    换液(见试验优化)。对于抑制剂对照组,抑制剂与底物一
    同孵育。
    (5)细胞可以在含有 Substrate 的培养基中直接观察。对于
    终点分析法,PBS 清洗细胞,荧光显微镜观察细胞,使用观
    察绿色荧光的滤片(激发/发射:485/515 nm)。
    (6)对于悬浮细胞,轻轻摇晃重悬细胞。荧光酶标仪设置
    激发波长 488 nm和发射波长520 nm。建议贴壁细胞使用底
    部阅读方式建议贴壁细胞。 贴壁细胞密度的变化可能导致不
    准确的读数。
    注意事项
    1. 细胞可以用终浓度为 1 μM 的 Hoechst 33342 染料共同染
    色,使细胞核产生蓝色荧光染色(激发/发射:346/460 nm)。
    2. SuperView 488 染色可以被甲醛固定,但与甲醇固定不兼
    容。
    3. 甲醛固定的 SuperView 488 染色细胞可以用 0.1%
    TritonX-100 处理后进行后续染色,但这样处理后的染色的
    亮度可能会减弱
    SuperViewTM 488 Caspase-3 活细胞分析试剂盒