检测原理

试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人NSE抗体的包被微孔中，依次加入标本、HRP标记的检测抗原，经过温育并 洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中人神经特异性烯醇化酶(NSE)的存在与否。

样品收集、处理及保存方法

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

尿液样本

同血标本一样，尿液标本受饮食、运动、药物量等因素的影响也较大，特别是饮食的影响，故一般来说晨尿优于随机尿。晨尿是指清晨起床后的 次尿标本，较浓缩和酸化，有形成分(如血细胞，上皮细胞，管形)相对集中便于观察。随机尿即随意一次尿，留取方便，但受饮食、运动、药物影响较甚，易于出现假阳性和假阴性结果，如饮食性，饮食性，维生素C干扰潜血结果等。餐后尿(午餐后2小时收集的患者尿液)适用于，和尿胆原的检查，此时的尿标本可增加试验敏感性，检出较轻微的。12小时尿细胞计数即Addis计数(前晚8时排空膀胱后留取至次日晨8时的所有尿液)，因时间较长，细菌易繁殖，须加入防腐剂甲醛。24小时尿( 天晨8时排空膀胱后留取至次日晨8时的所有尿液)中化学物质的定量，包括蛋白，糖，尿17-酮、17-羟类固醇，儿茶酚胺，Ca2+等，检测不同的物质，选择不同的防腐剂防腐。清洁中段尿多用于尿细菌培养，要求无菌，冲洗外阴后留取标本。所有尿标本的收集都应足量，最少12 ml， 50 ml，定时尿须全部收集，对女性患者应避免分泌物、经血污染尿标本。

用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

自备物品

1.  酶标仪（450nm）

2.  高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.  37℃恒温箱

操作注意事项

1.  试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.  预处理后的样本请按照操作步骤用样本稀释液适当稀释以达到试剂盒的的 检测效果。

4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.  所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒性能

1.  准确性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；阴性对照孔OD值平均值≤0.15，说明试验结果有效。

2.  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

3.  重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

4.  贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

5.  有效期：6个月

本公司试剂盒可检测人、猴、猪、兔、大鼠、小鼠、豚鼠、牛、鸡、鸭、犬、羊、植物等类型；适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种标本类型。可检测白介素、紧张素、衣原体、趋化因子等各种指标。每个指标需提供100微升样品，如做复孔则需要200微升。标本离心处理后可通过泡沫箱加干冰或者冰袋寄送我公司。本公司提供的试剂盒均为科研产品，仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验。

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