检测原理

试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人TNFsR-Ⅰ抗体的包被微孔中，依次加入标本、HRP标记的检测抗原，经过温育并 洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)的存在与否。

样品收集、处理及保存方法

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

血液样本

有些生理因素，如吸烟、进食、运动、情绪波动、妊娠、体位等均可影响血液中某些成分的变化，有些甚至还有昼夜变化。因此血液标本的采集应尽量避免生理因素干扰，以条件一致为宜，如无法避免，应在标本上注明该因素。

1．外周血

一般选取左手无名指内侧采血，该部位应无冻疮，炎症，水肿，破损。如该部位不符合要求，以其他手指部位代替。对烧伤病人，可选择皮肤完整处采血。由于部分血液常规检测(如白细胞计数、分类等)受生理因素影响波动过大，比较时宜使条件尽量一致。涉及到体内出、凝血功能的检测项目(如血小板计数，出血时间或凝血时间等)的检测，一定要注意了解患者是否用过抗凝、促凝药物，以便在减少或避免干扰因素的影响。

2．静脉血

除涉及各种止血和血栓检测等项目需采用抗凝静脉血血浆外，目前绝大多数检测项目的分析检测可直接采用静脉血的血清。在血清检测项目中，有些(如血糖，血脂等)受饮食及昼夜因素影响较大，一般以清晨空腹血标本为宜；有些在血中衰变较快(血清酶活性测定如ACP活性等)，0~4℃贮存活性减弱也不一，这些项目的检测必须及时而快速；有些(如肌酸激酶等)受运动等因素影响较大。抽血时避免溶血的发生也十分重要，尤其涉及血钾，LDH等的测定。

自备物品

1.  酶标仪（450nm）

2.  高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.  37℃恒温箱

操作注意事项

1.  试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.  预处理后的样本请按照操作步骤用样本稀释液适当稀释以达到试剂盒的的 检测效果。

4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.  所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒性能

1.  准确性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；阴性对照孔OD值平均值≤0.15，说明试验结果有效。

2.  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

3.  重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

4.  贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

5.  有效期：6个月

本公司试剂盒可检测人、猴、猪、兔、大鼠、小鼠、豚鼠、牛、鸡、鸭、犬、羊、植物等类型；适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种标本类型。可检测白介素、血管紧张素、肺炎衣原体、趋化因子等各种指标。每个指标需提供100微升样品，如做复孔则需要200微升。标本离心处理后可通过泡沫箱加干冰或者冰袋寄送我公司。本公司提供的试剂盒均为科研产品，仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验。

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